急性心肌梗死患者外周血单核细胞p38的表达及其意义

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1、0分类号：R6单位代码：10752密级：公开学号：2009342宁夏医科大学硕士研究生学位论文急性心肌梗死患者外周血单核细胞p38的表达及其意义Thepxpressionofp38mitogenactivatedproteinkinasesinpost-infarctedpatients’peripheralbloodmononuclearcells.学位申请人：陈乾指导教师：徐方芳副教授申请学位门类级别：医学专业名称：内科学研究方向：心血管疾病的临床研究所在学院：临床学院论文完成日期：二〇一二年四月宁夏医科大学研究生院NingxiaMedi

2、calCollegeThesisforApplicationofMasterDegreeThepxpressofp38mitogenactivatedproteinkinasesinpost-infarctedpatients’peripheralbloodmononuclearcells.Student’sName:ChenqianSupervisor:XufangfangSubjectCategory:MedicineMajor:InternalMedicineSpecialty:BasicandclinicalstudyofCardio

3、vasculardiseaseCollege:ClinicalCollegeCompletionDate:Apr2012宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声

4、明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要急性心肌梗死患者外周血单核细胞p38的表达及其意义摘要目的急性心肌梗死发生后，因血栓形成、心肌细胞炎症反应、残余心肌细胞工作负荷加重、

5、多种体液因子发生剧烈变化等因素，致使患者心输出量急剧下降、心脏扩大等病理过程相继发生并造成严重后果。本研究采集急性心肌梗死患者外周静脉血样，通过分子生物学技术检测急性心肌梗死患者不同时间点外周静脉血单核细胞中p38蛋白的表达，初步探讨p38蛋白的表达与心梗后炎症反应的关系。方法1.病例采集：采集宁夏医科大学总医院、银川市第一人民医院心内科急性心肌梗死患者40例做为实验组（又称心梗阻），根据患者心梗时间将实验组分为四个亚组，分别为心梗后3、6、12及24小时组；同期采集健康成人20例做为健康对照组；对于入组的实验组或健康对照组成员，符合病例收集

6、标准（见正文）并取得其同意后，抽取其外周静脉血9ml-10ml送实验室处理。2.分子生物学检测：2.1单核细胞的采集：将所采集的血样平均分装于3个离心管中，等倍生理盐水稀释。另外选用3个离心管，每个离心管各加入单核细胞分离液3ml。分别将前述稀释好的血样缓缓加入单核细胞分离液中，以血样和单核细胞分离液之间明显分层为佳。将其放入水平低温离心机中，3000rmp/min离心25分钟后取出，此时可见离心管中呈现明显分层现象。收集最上层的淡黄色血清并置入-80℃备用，同时将离心管中淡黄色血清之下的单核细胞层收集于EP管中。2.2单核细胞的裂解及总蛋白

7、的提取：将上述所收集的含有单核细胞的EP管放入4℃离心机中，3000rmp/min离心5分钟，取出EP管，目视可见白色单核细胞沉积于EP管底部，弃上清液之后，用PBS缓冲液吹悬单核细胞后再次3000rmp/min离心5min，完成后再次弃去上清，PBS缓冲液吹悬、离心，该过程重复2-3次后可在2个EP管中得到较为纯净的单核细胞，此后为三个EP管编号为1、2、3号。向1号EP管中加入TrizolI宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要试剂裂解单核细胞后置于-80℃保存；向2、3号EP管中加入事先配置好的蛋白提取液200ul，放于4℃摇床上轻摇1

8、5分钟后置于4℃离心机中，14000rmp/min离心15分钟后收集上清，置于另外两个EP管中，-80℃保存备用。此后，每份血样中单核细胞内p38α基因的转录水平、