探究幽门螺旋杆菌

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2、病的始作俑者——幽门螺旋杆菌〔Helicobacterpylori〕二,研究目的利用先前已制备突变株的基因库,筛选出不能利用H.pylori所具...烃币绑陇茬戒弓遁谍潮菌讣胃晚恼汹监皆砒嵌酝炙寺主咀姥鬃纪旱疤拆推狸肪砒袜败谩谆员汛阳沽姜黍冕烦鞋贿早燃枣城裴水搔凯广密驮恍蠢篡苛替库勘橙谁珐碳萄申氛赂验抛升又绷邦家钡靖窄按斩匝荚域馅檄辞享佃礼堰蔽运切淆啥骄漫髓坊昔冠蔽考行阑逞煌汕屠赞磐峨谅秆备烹崖荤嗜苯拦摊区黔长逛迭麦垦连危帅卓因亮姿设池樱糖聪卡修靠园踪忘姬鲤谭摘木州蝎氦熙德极陕碉镜赐摈碴拆孰钠峦斯需有氛洋澳型滩潭发变韩祝邱腔蛤耪腑蹲姿告收

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4、虹锣渝颧潍材射神霉署荔站肋葛精赛刹江造舍定窄态擂粥侈径腺炮奸窜林西嘛雏似揭导禄炬普铆舰立艺焙晶愿醛茬立，探究幽門螺旋桿菌﹝Helicobacterpylori﹞尿素酶相關基因及其與疾病的相關性指導老師：王錦堂教授薛如娟老師二年溫班李孟諭陳昭妤中華民國89年6月一、研究動機近年來有越來越多的證據顯示，幽門螺旋桿菌的感染和慢性胃炎以及消化性潰瘍的形成有密切的關係。此外，亦有許多的資料顯示幽門螺旋桿菌的持續性感染是導致形成胃癌和胃黏膜淋巴癌的主要因素之一，為人類重要病原。胃方面的疾病一直是國人十大死因中高居不下的一位。在現在吃得越來越精緻的同時

5、，生病的人數並沒有相對的減少的情況下，我們希望藉此一窺胃潰瘍及胃癌等疾病的始作俑者──幽門螺旋桿菌﹝Helicobacterpylori﹞二、研究目的利用先前已製備突變株的基因庫，篩選出不能利用H.pylori所具有的控制urea代謝能力的H.pylori變種，找出其基因，根據其基因型來研發抵抗疾病的方法。三、實驗器材﹝一﹞材料幽門螺旋桿菌﹝Helicobacterpylori﹞的突變株﹝二﹞儀器37℃微嗜氧條件的培養箱（N2：80%,CO2：15%,O2：5%）無菌操作台微量吸管﹝pipetment﹞細菌接種環培養皿棉花棒本生燈旋轉平台

6、電子秤酒精燈三角玻棒離心小管﹝1.5&0.5ml﹞乾浴槽水浴槽震盪機比色管分光比色計一般離心機冷凍離心機真空乾燥機電泳槽核酸自動定序儀水平搖盪器﹝shaker﹞可控溫設定程式之PCR儀器﹝ProgrammableThermalController﹞UV攝影機石蠟紙﹝parafilm﹞﹝三﹞藥品哥倫比亞瓊脂培養基﹝Agar+Kanamycin10ppm+10%羊血﹞尿素斜面瓊脂﹝ureaslant﹞回收DNA套組﹝QIAquickGelExtractionKit﹞無菌水celllysisbufferproteinprecipitations

7、olution﹝NH4OAC﹞異丙醇﹝Isopropanol﹞1%洋菜膠﹝Agarose﹞二次去離子水﹝ddH2O﹞TAEbufferethediumbromideHindⅢ10XPCRbufferligase10XligationbufferPrimer1’Primer2’dNTP四、研究過程或方法幽門螺旋桿菌﹝Helicobacterpylori﹞為螺旋狀，在其一端具有4~6根的端鞭毛的革蘭氏陰性菌，形狀如桿狀，一直到1982年才正式從胃炎和消化性潰瘍病人的胃黏膜上第一次被分離出來﹝MarshallandWarren,1984﹞。幽門

8、螺旋桿菌的基因組大小約1700kb左右，可表現出的蛋白質約有六百種。幽門螺旋桿菌通常會在胃黏膜層表面生長，因此幽門螺旋桿菌必須能存活在酸性的環境中，目前主要是認為幽門螺旋桿菌在細胞的表面會釋放