利用农杆菌介导法和基因枪法获得转bri基因玉米材料

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1、山东农业大学硕士学位论文利用农杆菌介导法和基因枪法获得转BRi基因玉米材料姓名：李燕燕申请学位级别：硕士专业：作物遗传育种指导教师：孙庆泉20120614山东农业大学硕士学位论文中文摘要基因工程和转基因技术的发展，克服了传统杂交育种方式的不足，为种质资源的创新和作物品质改良提供了新的思路和方法。农杆菌介导法和基因枪法是玉米遗传转化的主要方法。本试验采用农杆菌介导法和基因枪法对18-599、齐319、A188和昌7·2四个玉米自交系幼胚诱导的II型愈伤组织进行了BRi基因的遗传转化。主要结果如下：1．玉米幼胚愈伤组织受体系统建立受基因型影响。四个供试玉米自交系18-599、齐

2、319、A188和昌7—2的幼胚都能诱导产生Il型愈伤组织。其中，18-599所获愈伤组织质量好数量多，适于转化；齐319和昌7．2愈伤颗粒松散，质地硬，愈伤质量不高；A188愈伤组织呈白色，颗粒较松散，具有一定的数量。生根壮苗培养基中生根粉浓度为1．5mg·Ld时生根效果最好。2．浸染强度是影响农杆菌转化效率的重要因素之一。对农杆菌介导法浸染时间和菌液浓度的参数优化研究表明，18．599的最佳浸染强度为OD600=0．6，10min，齐319的最佳浸染强度为OD600=0．4，20min。3．在基因枪转化过程中，愈伤组织的预处理方式、钨粉用量、质粒浓度均对转化率产生影响。

3、愈伤组织先干燥2h，再高渗处理2h的转化率比单纯高渗处理高；钨粉浓度为100pg／枪时转化率高且节省成本；质粒浓度为1．5肛∥枪时的转化率高。4．通过分子检测证明已经获得阳性转化植株。在农杆菌介导转化株的PCR检测中，94株A188转化苗中有22株为阳性植株，转化率23．4％；208株18．599转化苗中有26株为阳性植株，转化率为12．5％；20株齐319转化苗中仅检测到l株为阳性，转化率为5％；昌7．2未获得阳性植株。在基因枪转化株的PCR检测中，56株转化苗中，18-59946株，有3株为阳性植株，转化率6．52％，转化率较低。齐31910株，未获得阳性植株。经RT．

4、PCR检测，共得到8株RT．PCR阳性植株；再经Southernblotting验证，获得了转化植株。关键词：玉米；受体系统；觥f：农杆菌介导；基因枪轰击；分子检测利用农杆菌介导法和基因枪法获得转BRi基因玉米材料AbstractThedevelopmentofGeneticengineeringandtransgenictechnology,makesuptheweaknesssoftraditionalhybridbreedingwayandprovidesnewideasandmethodsfortheinnovationofthegermplasmresources

5、andcropqualityimprovement．Agrobacterium—mediatedtransformationandgenegunisthemaintwogenetictransformationmethods．ThistesttransformedBRigeneintotypeIIcallusderivedfromimmatureembryosoftheinbredlines18—599，Qi319，A188andchan97-2viaAgrobacterium--mediatedtransformationandgenegun．Theresultswere

6、asfollows：1．GenetictypeisthemainfactorinfluencingtheproductionoftypeIIcallus．Immatureembryosfromthefourselectedinbredlines18—599，Qi319，A188andchang7-2Canbeallinduced．Amongthem，thequalityof18-599inducedcallusWasgood，thenumberWaslarge，anditWassuitableforgenetictransformation；Theparticlesofca

7、llusderivedfromQi319andchan97—2Wasloose，thetexturewashard,andthecallusqualityisbad；A188calluswaswhite，particleloose，andhasacertainnumber．TheconcentrationofABTinmediumWasadjustedtO1．5mg·L-I，becauseinthisconditiontheroothadthemaximumnumberandtheaveragerootnumber