农村人群显性和隐匿性乙型肝炎病毒感染及分子进化特征分析

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1、复口.人学硕士学位论文学校代码：10246学号：09211020011硕士学位论文农村人群显性和隐匿性乙型肝炎病毒感染及分子进化特征分析复旦大学公共卫生学院卫生部公共卫生安全重点实验室流行病与卫生统计学专业姓名：姚晴青指导教师：郑英杰二〇一二年四月本课题承传染病防治科技重大专项（No.:2008ZX10002-012)支持指导小组成员名单郑英杰畐IJ教授陆一涵讲师袁权讲师高眉扬主管技师卫国荣主管技师复大学硕I:学位论文目录mm6ABSTRACT7-_s八一*-rt刖m81.隐匿性乙型肝炎病毒感染81.1.乙型肝

2、炎与隐匿性乙型肝炎81.2.OBI存在证据及形成原因81.3.OBI免疫学特征91.4.OBr流行病学特征91.5.OBI的危害101.5.1.输血安全101.5.2.移植安全111.5.3.免疫失败及母婴传播的可能性111.5.4.重叠感染的风险111.5.5.长期结局112.生物进化理论及应用123.乙型肝炎病毒分子特征134.调查现场（浙江省德清县）一般情况155.本研究的意义和创新之处1618研究方法181.现场调查181.1.研究地区181.2.研究

3、对象181.2.1.样本含量估计181.2.2.抽样方法181.3.现场调査181.3.1.现场调查步骤181.3.2.补充调查191.3.3.质量控制191.4.实验室检测191.4.1.试剂及仪器191.4.2.血清分离201.4.3.定性检测HBsAg-ELISA法20复旦大学硕士学位论文1.4.4.HBVDNA自动抽提211.4.5.HBV病毒载量测定211.4.6.HBVDNA手工抽提221.4.7.HBVS基因区目的片段巢氏PCR扩增221.4.8.PC

4、R产物电泳231.4.9.PCR产物纯化及测序231.4.10.测序结果分析及序列拼接231.4.11.数据库建立及对接232.统计学分析233.乙型肝炎病毒感染结果判定标准244.基因型及核苷酸突变分析245.HBV氨基酸突变分析246.HBV血清学分析24结果261.调查抽样情况262.调查对象基本情况263.调查对象HBV感染率分析274.不同特征人群乙型肝炎病毒感染情况及影响因素分析274.1.HBV感染率分布特征分析274.2.相关因素对HBV感染率的log

5、istic回归分析285.0BI感染率分析326.调查对象病毒载量结果分析327.调查对象序列扩增结果S基因区目的片段进化分析337.1.参考序列337.2.HBV病毒株S基因区目的片段进化分析337.2.1.S基因区目的片段核苷酸进化分析337.2.2.S基因区目的片段氨基酸进化分析348.显性HBV病毒株与0BIHBV病毒株对比分析428.1.基因型对比分析428.2.氨基酸突变对比分析42a44参考文献48尉己55纖57复旦大学硕丄?学位论文摘要目的了解浙江省德清县农村

6、自然人群显性和隐匿性乙型肝炎病毒感染情况及显性和隐匿性病毒株s基因的分子特征。方法采用多级抽样方法，在分层抽样的基础上多级抽样，抽取新安镇全镇和筏头乡四个行政村，进行横断面调查，在取得调查对象知情同意的基础上采集调查表信息并采血，做好质量控制，必要时补充调查。采用Epidata3.2软件进行调查表信息录入，采用双录入策略并进行核对，采用SPSS18.0软件进行数据分析，分析乙肝感染的危险因素及实验室检测结果；对所有样品进行检测HBsAgELISA检测及病毒载量Real-timePCR测定，并对HBsAg检测阳性或病毒载量测定

7、阳性的标本进行进一步的HBVS基因PCR扩增和测序，采用MEGA5.0软件对测得序列进行进化分析，分析当地人群目的片段分子特征。结果共调查对象1720位，调查人群HBsAg阳性者共162例，OBI感染者共4例，HBV感染率为9.51%(166/1720)，性别和肝炎患病史是影响HBV感染的主要因素，女性调查对象HBV感染阳性的危险性显著低于男性调查对象，OR=0.522，95%CI:(0.359,0.759)；有肝炎患病史的调査对象HBV感染阳性的危险性显著高于无肝炎病史的调查对象，OR=2.525，95%CI:(1.520

8、，4.196)。本次调查OBI的感染率为2.57%。（4/1558)。显性和隐匿性病毒株病毒载量中位数及四分位数范围分别为866(425,12500)(IU/mI)和314(216，677.5)(IU/ml),前者显著高于后者（奶秩和检验，z=3.080,P=0.002)。HBsAg阳性血