内脂素在心肌细胞肥厚和炎症反应中的作用及其机制

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1、河北医科大学博士学位论文内脂素在心肌细胞肥厚和炎症反应中的作用及其机制姓名：常亮申请学位级别：博士专业：内科学指导教师：李拥军201204中文摘要内脂素在心肌细胞肥厚和炎症反应中的作用及其机制摘要各种原因造或的心脏做功的不断增加会导致心脏为满足心脏做功增加的需要而发生相应的适应性改变，即心肌肥厚。心肌肥厚在短时间内可维持或增加心输出量，然而，随着心肌肥厚的进展，会逐渐发展为失代偿性心肌肥厚，并出现心力衰竭。目前的心肌肥厚和心衰治疗方案均有一定的副作用，因此继续研究疾病的基本病因以便选择特异性的对因治疗方案和靶点具有特殊的重要性和

2、迫切性。炎症细胞因子是细胞受内、外环境变化刺激后分泌的一组功能性蛋白分子，在众多炎症细胞因子中，起主要作用的是n师．a、IL．113、IL．6、TGF．13、IL．10。炎症在循环系统疾病中发挥重要作用。炎症与高血压相互影响，互为因果。动脉粥样硬化(AS)是一种炎症性疾病，粥样斑块的发展和破裂导致ACS的全过程被认为是对损伤的炎性反映。流行病学证实，急性冠脉综合征(ACS)患者血清中与炎症有关的生物标志如C反应蛋白(CI冲)、金属基质蛋白酶(MMPs)、白介素一6(IL．6)等升高，已被用于未来心血管事件发生的预测指标。炎症细胞

3、因子级联反应对于心衰的发生、发展具有重要作用。研究表明，其可降低心肌收缩力及心输出量。心衰时炎症细胞因子增加，其水平是判断心衰严重程度及预后的指标，抗炎治疗可降低高危患者心衰的发生率。传统观点认为，脂肪组织单纯是一种贮备能量的器官。随着瘦素(1eptin)、抵抗素(resistin)、脂联素(adiponectin)、网膜素(omentin)以及内脂素(visfatin)等大量脂肪组织分泌的血管活性物质的发现，脂肪组织的内分泌功能逐渐引起人们的重视。目前，脂肪组织作为一个内分泌器官的观点已成为学术界的共识，脂肪组织分泌各种血管活

4、性物质统称为脂肪细胞因子。内脂素是一种新近发现脂肪细胞因子，并广泛表达在各种组织，这表明它具有多功能性。风湿性疾病、肥胖、糖尿病、急性肺损伤、自然分娩和感染诱发早产进程等病理生理情况下血浆内脂素水平明显升高。内脂素在心血管系统的作用也有很多报道：在急性冠脉综合征患者血浆内脂素水中文摘要平明显高；内脂素与不稳定斑块之间密切相关，富含巨噬细胞的斑块中内脂素表达明显增高；内脂素能促进血管平滑肌细胞的成熟，促进血管重塑等作用。内脂素最初是从活化的外周血淋巴细胞的cDNA分离出来的，与B淋巴细胞的成熟有关。有研究发现，内脂素是一个重要的前

5、炎性因子，在多种病理生理过程中发挥重要作用，内脂素可能是通过和一些尚未确认的受体结合或者通过特殊信号传导途径诱导炎症细胞因子的产生。此外，内脂素还可以诱导近小鼠循环中IL．6的水平增加。内脂素作为一种新的脂肪细胞因子，对它的的功能和作用仍然存在很多争议，内脂素的临床意义有待进一步研究。研究发现内脂素在循环系统中发挥的重要作用，但是大部分研究都集中于体内实验，有关内脂素体外研究尤其是在细胞水平的报道较少。目前有关内脂素在心脏细胞中的的表达，以及其在心肌细胞肥大中的作用及其机制的研究未见报道；而且，尚未见有关内脂素与心肌细胞炎症反应

6、的研究。本研究目的是通过培养SD乳鼠原代心肌细胞，在细胞水平观察内脂素在心肌细胞肥厚以及心肌细胞炎症反应中的作用及其分子生物学机制。本研究主要包括以下四部分：第一部分内脂素在心肌细胞中的表达目的：成功提取并培养心肌细胞，观察心肌细胞是否表达内脂素，为后的进一步研究奠定基础。方法：购买出生2~3天的SDSL鼠，提取并培养原代心肌细胞，培养48h后换为无血清的培养基继续培养24h，之后应用RT．PCR、Western．Blot技术观察心肌细胞中内脂素表达情况。结果：心肌细胞中内脂素mRNA和蛋白均有表达。结论：心肌细胞能够表达内脂素

7、。第二部分内脂素在血管紧张素II诱导的心肌细胞肥大中的表达及机制目的：建立心肌细胞肥大模型，观察在心肌细胞肥大过程中内脂素的表达情况，并进一步探讨内脂素变化的机制。方法：购买出生2~3天的SD乳鼠，提取并培养原代心肌细胞，培养48h后换为无血清的培养基继续培养24h，之后应用AngII干预心肌细胞。然后，分别应用Ang111型受体阻断剂——替米沙坦和AngII2型受体阻断剂_呻D123319被用于阻断AngII的作用，随后应用AngII1型受体中文摘要下游信号通道阻断剂SP600125、AG490和U0126进一步阻断AngII

8、作用。应用RT．PCR、Western．Blot技术检测心肌细胞中内脂素表达情况，应用Western．Blot技术检测心肌细胞BNP表达情况。应用MTT法检测心肌细胞活力。结果：在AngII的干预下，心肌细胞内脂素和BNP的表达随着AngII干预浓度和干预时间的