免疫磁珠法分选早孕期宫颈管脱落胎儿滋养细胞的研究

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1、目录目录……………………………………………………………………………………………….1英文缩略词表………………………………………………………………………………..2中文摘要…………………………………………………………………………3英文摘要………………………………………………………………………6正文………………………………………………………………………………10前言………………………………………………………………………….10材料与方法………………………………………………………………...13结果………………………………………………………………………….22讨论……………………………

2、…………………………………………….25结论………………………………………………………………………….30参考文献…………………………………………………………………………31附图……………………………………………………………………………….35致谢……………………………………………………………………………….37附录……………………………………………………………………………….38综述……………………………………………………………………………….39正文………………………………………………………………………….39参考文献…………………………………………………………………….43

3、1英文缩略词表Abbreviation英文缩写英文全称中文全称MACSmagnetic-affinitycellsorting磁亲和性细胞分离HLA-GHumanleukocyteantigenG人类白细胞抗原GMcAbMonoclonalantibody单克隆抗体PBSphosphatebuffersaline磷酸缓冲液PCRPolymerasechainreaction聚合酶链反应MHCmajorhistocompabilitycomplex主要组织相容性抗原复合物HEHaematoxylin-eosin苏木精-伊红WWeek周rpmroundperminute每分钟转数bu

4、fferbuffer缓冲液QF-PCRquantitation-fluorescencepolymeras定量荧光多聚酶链反应chainreaction2免疫磁珠法分选早孕期宫颈管脱落胎儿滋养细胞的研究中文摘要目的：（1）选择微创方法自早孕妇女宫颈管内获取脱落滋养细胞，观察滋养细胞的数量。（2）应用差速贴壁法培养获取的脱落细胞标本，探讨宫颈管内的脱落滋养细胞在体外培养的可行性。（3）联合差速贴壁法和免疫磁珠分选细胞法扩增并纯化胎儿滋养细胞，初步探索此方法纯化富集胚胎滋养细胞的效率。（4）探讨宫颈管内获取脱落滋养细胞在早孕期无创性产前诊断中应用的可行性。方法：（1）选择2010年1

5、0月-2011年5月在安徽医科大学第一附属医院产科门诊就诊的有停经史，尿妊娠实验阳性，妇科检查及超声证实早孕并自愿要求终止妊娠的或早孕期胚胎停止发育的共170例孕妇（孕6-10周）作为研究对象（包括预实验30例，正常早孕要求终止妊娠的120例及早孕胚胎停止发育的20例）。统计实验对象的孕周，根据末次月经法和超声法联合推算孕龄。超声下测得胚胎长度时，孕周=胚胎长（cm）+6.5；或按照妊娠囊最大内径推算：孕周=妊娠囊最大内径（cm）+3；早孕胚停标本则为B超提示胚胎停止发育（无心管搏动，不能见到胚芽等）。知情同意后，在为其行人工负压吸宫术前用特殊细胞刷无创获取其宫颈管脱落细胞。人工

6、流产过程中无菌获取实验对象的绒毛组织行常规绒毛细胞培养。将收集到脱落细胞标本的细胞刷置于无菌生理盐水中充分涮洗以获取宫颈管内的脱落细胞标本。标本中混有大量的宫颈黏液，加入适量胶原酶消化获取标3本中的宫颈黏液。取适量经过胶原酶消化处理的细胞标本行HE染色鉴定宫颈管内滋养细胞存在情况。（2）应用差速贴壁培养法培养上述经过处理的取自宫颈管的细胞标本，初步提高滋养细胞的比率。经过2-3天的培养，使标本中细胞增殖。将经差速贴壁培养及短期细胞增殖培养成功的正常早孕组67例标本取适量细胞悬液行HE染色鉴定标本中滋养细胞存在情况及比率。（3）选取阳性细胞比率及细胞量较多的15例标本（滋养细胞比率

7、≥30%）行抗HLA-G免疫磁珠法阳性分选（MACS）胚胎滋养细胞,比较MACS分选前后滋养细胞的比率。结果:1.预实验结果（1）预实验中HE染色30例正常早孕组获取的胚胎脱落滋养细胞样本，19例标本中见滋养细胞，标本阳性率63.3%。镜下平均可见滋养细胞数为7个。（2）19例阳性标本用不同的方法培养，培养成功15例（差速贴壁组7例，常规对照组8例），再次行HE染色8例标本见滋养细胞（差速贴壁组6例，常规对照组2例），卡方检验比较两种培养方法的滋养细胞培养成功率存在统计学差异，