医学论文-免疫磁珠法分离和提纯雪旺细胞的实验研究

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1、医学论文-免疫磁珠法分离和提纯雪旺细胞的实验研究                作者：黄明罗卓荆肖伟张强【摘要】 ［目的］探讨利用免疫磁珠从SD大鼠坐骨神经分离培养获得大量、高纯度雪旺细胞的方法。［方法］选用4～7dSD大鼠，无菌条件下取双侧坐骨神经，解剖镜下剥离去除神经外膜，获得神经束，将神经束剪碎至1mm3大小。采用双酶2次消化法消化，胎牛血清中止消化后，离心并加入DF12培养液培养。7d后应用免疫磁珠法对细胞进行纯化培养，培养2d后进行传代接种。培养过程中对细胞进行形态学观察、计数及活力测定；MTT法绘制细胞生长曲线，采用免疫细胞化学荧光染色对细胞进行鉴

2、定并且计算所得细胞纯度。［结果］分离培养所得细胞即为雪旺细胞；采用免疫磁珠法能对培养所得雪旺细胞进行纯化。纯化后雪旺细胞活力为96%±0.5％，纯度98%±1.1%，培养2d后就可以传代。［结论］免疫磁珠法可以用于雪旺细胞的纯化培养，所得雪旺细胞纯度高，活力强，能满足组织工程人工神经的需要。【关键词】 雪旺细胞；免疫磁珠；坐骨神经   Abstract：［Objective］TointroduceamethodtoobtainSchwanncellsfromnewlybornSDratsmassivelyandpurelybyimmunomagnetichea

3、dsmethod.［Method］SDratsthathadbeenbornwithin5to7dayswereused.Theirbilateralsciaticnervesweredissectedundersterilecondition.Under16×microscopethenervefasciclesandtheepineuriumwerecarefullyextractedinodertogetthenervetractwithoutimpuritycell.Thenthenervetractwascut intosmallparticleab

4、out1mm3.Twoenzymes(0.25%trypsinaseand0.2%collagenaseⅠ)wereusedtodigesttheparticleofsciaticnervespecimenstwice.Afterusing20%fetalbovineserumtostoptheprocessofdigestion,centrifugate(1000r/min,5min)andDF12culturemediumwasaddedintotheprecipitation.Sevendayslater,Schwanncellswerepurified

5、withimmunomagneticheads.Duringthewholeprocess,thechangeofSchwanncellswasobservedunderthe invertedbiologicalmicroscopandvitalforceofSchwanncellswasevaluated.ThegrowthcurveofSchwanncellwasdrawnwithMTT.TheSchwanncellswasidenticatedunderimmunofluorescenttestandrecordthepurity.［Result］Th

6、ecellseparatedfromtheSDrat'ssciaticnerveandculturedinincubatorwasaffirmedasSchwanncells.ImmunomagneticheadscanbeusedtopurifytheSchwanncells.The96%vigorand98%pureSchwanncellculturesweregeneratedandpassagedaftertwodays.［Conclusion］Thismethodcanobtainmassivepurifiednormalschwanncellsto

7、satisfytheneedoftissueengineeredbioartificialnervegraft.   Keywords：Schwanncell; immunomagneticheads; sciaticnerve    雪旺细胞（Schwanncell，SC）是周围神经系统的主要胶质细胞，包绕周围神经的轴突，形成髓鞘［1］。现已证明周围神经的再生能力主要归功于雪旺细胞，它能分泌少量神经营养因子促进神经轴突的发芽再生；其分泌的细胞外基质能够形成类髓鞘的管状结构，为再生轴突的延伸和生长提供隧道［2］。雪旺细胞可以起到神经轴突的“导管”、“导向”作

8、用。所以目前认为雪旺细胞在周围神经损伤