两种地霉对体外健康甲板的侵袭力及胞外酶普的实验性研究

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1、河北医科大学硕士学位论文两种地霉对体外健康甲板的侵袭力及胞外酶普的实验性研究姓名：李力翠申请学位级别：硕士专业：皮肤病与性病学指导教师：朱敬先；高顺强201203中文摘要两种地霉对体外健康甲板的侵袭力及胞外酶谱的实验性研究摘要目的：本实验通过建立真菌透甲模型，探讨林生地霉、白地霉在体外能否侵犯健康甲板，并通过测定透甲时间来比较两种地霉和红色毛癣菌的侵袭作用，同时采用扫描电镜微观观察受侵甲组织的情况。检测两种地霉和红色毛癣菌的细胞外分泌酶活性，比较三者的异同性，结合第一部分结果进行分析，讨论真菌胞外酶与对宿主的侵袭作用的关系。林生地霉(Geotrichumsilvicola

2、)为新近发现的一种罕见地霉11]，我科相继从一例脓癣患儿皮损中和一例中毒性表皮坏死松解症患者的血液中分离得到林生地霉12,3]，首次证明林生地霉能够侵犯人类。白地霉(Geotrichumcandidum)是地霉属的经典代表菌种，为条件性致病菌，以支气管感染最多见。至今未有地霉属真菌侵犯指甲的相关病例报道。红色毛癣菌(Trichophytonrubrum)为亲人性皮肤癣菌，主要侵犯皮肤、指(趾)甲，是我国甲真菌病优势致病菌【4‘5】，此试验中红色毛癣菌作为阳性对照菌。方法：林生地霉为河北医科大学第四医院真菌室保存，由中国科学院微生物研究所鉴定。白地霉标准菌株购自中国科学院微

3、生物研究所菌种保藏中心。红色毛癣菌购自北京医科大学附属第一医院真菌实验室。三株真菌均经过复苏培养及形态学和生化鉴定。1．建立真菌透甲模型，分为林生地霉组、白地霉组和红色毛癣菌组，其中红色毛癣菌组设定为阳性对照组，各组均包括1个阴性对照模型(即不加任何菌种)和1个阳性对照模型(将菌悬液直接加入液体培养基中)，观察并记录各组透甲时间，采用统计学方法比较是否存在差异性。2．采用扫描电镜观察受侵甲板的微观变化及菌丝和孢子的形态。3．通过半定量APIZYM细胞外酶活性系统(法国梅里埃生物公司)测定出林生地霉、白地霉及红色毛癣菌的19种胞外酶，包括四种酯酶、五种蛋白酶、二种水解酶和,

4、st,lcb糖发酵酶。结果：1．本实验中，三种真菌菌株均能透过甲板模型，其中林生地霉的透甲时间为(15．07+3．28)d，白地霉的透甲时间为(14．50-士1．67)d，红色毛癣菌的透甲时间为(6．76+1．72)d。林生地霉和白地霉的透甲时间均明显长于红色毛癣菌(PO．05)。2．扫描电镜观察：三株菌株均有菌丝从角化细胞缝隙及细胞中央穿过；3．API．ZYM试剂盒测定结果显示：(1)红色毛癣菌菌株碱性磷酸酶、胰凝乳蛋白酶及多数糖发酵酶活性明显高于林生地霉和白地霉；(2)白地霉和林生地霉的胞外酶谱大致相同

5、，二株菌株具有很高的同源性；(3)---株真菌均含有的胞外酶有：酯酶C4、类脂酯酶C8、白氨酸芳氨酶、缬氨酸芳氨酶、酸性磷酸酶、萘酚．AS．BI．磷酸水解酶。结论：1．林生地霉和白地霉均能穿透甲板，但透甲时间明显长于红色毛癣菌；2．扫描电镜观察：林生地霉、白地霉及红色毛癣菌侵袭的甲板均可观察到有菌丝穿过甲板，菌丝多从角化形成细胞边缘间隙中穿过，部分菌丝直接从角化细胞中央穿出；3．白地霉和林生地霉的胞外酶谱大致相同；4．红色毛癣菌大部分胞外酶活性明显高于林生地霉和白地霉，碱性磷酸酶、胰凝乳蛋白酶及糖发酵酶可能是分解破坏甲板组织的主要作用酶。关键词：白地霉；林生地霉；透甲时间

6、；扫描电镜；胞外酶；ExperimentalStudyofTwoGeotrichum’sPathogenicitytoHumanNailsandTheirExtracellularEnzymaticActivityABSTRACTobjective：Amodeloffungalperetrationtohumannailswasestablishedto咖dyifGeotrichumsivicola,GeotrichumcandidumandTrichophytonrubrumcouldviolatethehealthhumannailinvitro．Thenthedam

7、agednailwouldbeobservedbythescanningelectronmicroscope(SEM)．Nexttheextracellularenzymaticactivityofthreestrainsfungiwasinvestigated．Finallyaccordingtobothoftheresult，wewillanalysisthecorrelativitybetweenthepathogenicityandtheextracellularenzymaticactivity．G．Silvicol