氟西汀合并乳腺癌化疗药物临床应用的药理基础

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1、南方医科大学2009级硕士学位论文氟西汀合并乳腺癌化疗药物临床应用的药理基础一·●"It●●，●●●FharmacolOgybaslsUnclerlYlngr上UOXet1110●■·●'■COmblnat1011w1t11a11tl—broastCanCerQrUgSln●C上ln1Ca工aDp上lCat1011课题来源：教育部留学回国人员科研启动基金(教外司留【2010】609)专业名称学位申请人指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员药剂学周婷徐峰教授季爱民教授刘中秋教授葛发欢教授高级工程师张军教授陈吉生教授杨威高级工程师论文评阅人何艳玲教授李国成教授2012年3月2

2、7日广州硕士学位论文氟西汀合并乳腺癌化疗药物临床应用的药理基础硕士研究生：周婷指导老师：徐峰教授、季爱民教授摘要研究背景乳腺癌是全世界妇女最常见的恶性肿瘤之一，在我国，乳腺癌的发病率也在逐年上升。肿瘤和抑郁相关性的长期随访研究证实二者共病例比较高。由于乳腺位置的特殊性，使得乳腺癌并发抑郁障碍的发生率尤为突出，国内外研究显示乳腺癌病人中抑郁的症状呈现率大约在10．30％，抑郁障碍会严重影响患者的依从性、降低其生活质量及预后、甚至影响化疗药物的药代动力学从而影响药物的治疗效果。因此临床对乳腺癌伴发抑郁症的患者在化疗同时进行抗抑郁治疗。氟西汀便是其中之一，临床研究显示，接受氟

3、西汀治疗的患者其抑郁症状明显得到缓解、生活质量明显提高。肿瘤化疗失败最主要的一个原因就是存在多药耐药(multidrugresistanceMDR)。多药耐药性是指抗某种细胞毒药的耐药细胞对许多结构上无关和作用机制上不同的其他细胞毒药物产生交叉耐药。肿瘤MDR形成涉及以下四大机制：一、药物转运：药物转运蛋白P-糖蛋白(P．glycoprotc／nP-gP)及其编码基因MDRl基因，P．gP是研究的最多也是MDR形成最主要的蛋白；二、药物代谢：谷胱甘肽S转移酶(glutathionesepoxideu'ansferaseGST)，其中GST同工酶兀(GST．兀)与肿瘤耐药

4、及疾病进展密切相关；三、细胞凋亡基因：对那些通过诱导凋亡来杀伤肿瘤细胞的抗肿瘤药物，细胞凋亡基因的调控也与MDR发生息息相关，这其中就包括J下向调控基因p53和负向调控基因Bcl．2；四、药物靶：拓扑异构酶II中文摘要(topoisomerasolI，topoII)，topoII的定量或定性改变均影响药物疗效，这种类型的耐药称为不典型MDR。乳腺癌的多药耐药在临床上也十分常见，逆转乳腺癌化疗的多药耐药问题是乳腺癌治疗中亟待解决的问题。近年来对肿瘤化疗MDR逆转剂的研究越来越多，寻找低毒高效的逆转剂是研究的目标。以往的三代MDR逆转剂由于不良反应严重、溶解性差以及达到逆转

5、耐药效果所需剂量大等原因而在临床应用受限。近年来有研究发现新型抗抑郁药氟西汀(Fluoxetine，F啪可逆转肿瘤细胞的多药耐药，有望成为第四代肿瘤化疗的增敏剂或MDR逆转剂。目前，乳腺癌化疗方案中合用氟西汀已成为常规。但这种临床合并用药的药理基础尚无系统研究。本课题将研究常用的乳腺癌化疗药物阿霉素(AdriamycinADM)、紫杉醇(PaclitaxelPTX)与合用氟西汀后对乳腺癌细胞的药理作用及机制，为临床乳腺癌化疗药物合并氟西汀的临床应用提供药理学依据。本研究拟从两方面探讨氟西汀对乳腺癌细胞的增敏或逆转耐药作用。一方面我们从氟西汀诱导凋亡这一设想出发，研究联合

6、氟西汀前后细胞凋亡的变化，以及凋亡相关基因抑癌基因p53、抑凋亡基因Bcl．2的表达有无差异。另一方面，直接研究多药耐药P—gp基因和蛋白的表达以及GST．兀的表达，探讨氟西汀联合使用前后P—gP及GST-z的表达有无改变：从而阐明氟西汀逆转乳腺癌多药耐药的分子机制。研究目的l细胞水平检测化疗药物单独使用以及合并使用氟西汀对人乳腺癌细胞敏感株MCF．7及耐药株细胞MCF-7／ADM的细胞毒性作用。2流式细胞术检测氟西汀联合使用前后对细胞凋亡的影响。3在分子水平对p53、Bcl一2、P-gP、GST-兀蛋白以及MDRImRNA表达进行检测，探讨氟西汀逆转乳腺癌多药耐药的分

7、子机制。实验方法lMTT法检测氟西汀联合用药前后对细胞增殖抑制的影响倍比稀释氟西汀母液至80、40、20、lO、5、2．5lag／ml的工作浓度；同样硕士学位论文的稀释阿霉素至80、40、20、lO、5、2．5gg／ml和4、2、l、0．5、0．25、0．1251ag／ml：紫杉醇至16、8、4、2、l、0．5}tg／rnl。进行MTT实验，加药72h后检测细胞增殖抑制率，细胞增殖抑制率小于10％范围内选择氟西汀的适宜浓度作为联合用药浓度，紫杉醇和阿霉素的用药浓度不变再次进行MTT实验。计算阿霉素、紫杉醇联合氟西汀前后的IC50值，得出氟