β-榄香烯与吉非替尼逆转乳腺癌mcf-7细胞他莫西芬耐药的实验研究

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1、B一榄香烯与吉非替尼逆转乳腺癌MCF一7细胞他莫西芬耐药的实验研究计：学位论文：9l页表格：10个插图：18幅张斌指导教师：张阳教授申请学位级别：博士学位专业名称：中西医结合临床论文提交日期：2012年4月论文答辩日期：2012年5月学位授予单位：大连医科大学学位授予日期：2012年6月评阅人：答辩委员会主席：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与

2、我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字目期：坐年!月上日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11(一)第一部分：乳腺癌MCF一7细胞体外干细胞培养条件下雌激素受体表达与治疗敏感性初探⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11(--)第二部分：p．榄香烯与吉非替尼联合他莫西芬对乳腺癌MCF一7细胞的增

3、殖抑制作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24(三)第三部分：p一榄香烯逆转乳腺癌MCF一7细胞他莫西芬耐药的实验研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37(四)第四部分：吉非替尼逆转乳腺癌MCF．7细胞他莫西芬耐药的实验研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯56三、文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯75(一)综述正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯75(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯84四、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯90五、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91B一榄香烯与吉非替尼逆转乳腺癌MOF-7细胞他莫西芬耐药的实验研究博士生姓名：指导教师：专业名称：张斌张阳教授中西医结合临床摘要目的：内分泌治疗是激素受体阳性乳腺癌的重要治疗手段，但许多ERIjD性的患者在内分泌治疗过程中出现ER转阴，导致获得性耐药，因此对内分泌治疗获得性耐药研究备受关注。对耐药机制的研究在ER水平和信号转导机制的研究则最被重视，内分泌耐药是ER和EGFR家族信号网络的双向作用共同调节的，ER阳性的细胞在MAPK信号表达上调后转为ER阴性。乳腺癌的综合治疗中，内分泌治疗多是序贯于放化疗之后，内分泌治疗过程

5、中也可能伴有乳腺癌干细胞的富集，干细胞的富集是否构成内分泌耐药的原因，如何提高内分泌治疗的疗效，并延缓和逆转内分泌耐药是临床亟待解决的问题。中药p一榄香烯(p—Elemene，fl-ELE)是从姜科植物温郁金中提取的抗癌有效成分，临床上应用于多种肿瘤的放疗增敏及化疗辅助，尚有逆转化疗耐药的研究，有报道与内分泌治疗具有踟同作用。吉非替尼(Gefitinib，Iressa)是小分子酪氨酸激酶抑制剂，主要应用于肺癌的分子靶向治疗，近年来也应用于乳腺癌的内分泌联合治疗研究。据文献报道，化疗多药耐药逆转的研究中，具有逆转耐药的药物本身与化疗药物具备协同治疗的作用

6、，与内分泌治疗有协同作用的药物是否具备逆转耐药的作用，对此我们进行一系列实验设计。首先，本研究模拟了人体乳腺癌治疗后复发的生物学特点，引入乳腺癌干细胞的概念，即在综合治疗后富集了少量的乳腺癌干细胞，在适当条件下进行增殖分化，导致乳腺癌复发的过程，通过体外干细胞培养条件下培养激素敏感的人乳腺癌MCF一7细胞，检测具备干细胞特性的悬浮球细胞雌激素受体(ER)的表达及对他莫西芬(Tamoxifen，TAM)的治疗敏感性，初步探讨内分泌耐药与乳腺癌干细胞的关系；并同时构建乳腺癌对TAM耐药的MCF一7／TAM细胞株(干细胞培养及传统低剂量诱导的方法)，检测耐药

7、细胞中ER在mI冰A和蛋白表达水平改变，相关信号转导通路MAPK通路蛋白RAS、MEKI／2、p-ERKl／2水平变化，分析耐药MCF一7对TAM的耐药机制。其次，通过B．ELE、Gefitinib与TAM的联合应用，采用不同给药顺序十预乳腺癌MCF．7细胞的增殖，确定B．ELE茅HGefitinib与TAM在内分泌治疗方面的联合应用价值，探索最佳给药顺序，确定其对MCt?一7,uMCF一7／TAM细胞的低剂量(细胞增殖抑制率<5％)。继而采用低剂量的B—ELE和Gefitinib作为逆转实验的干预剂量，处理对TAM耐药的MCF一7FIPAM细胞，通过

8、后者恢复对TAM敏感的现象，进一步检测治疗过程中ERa、ERl8在mRNA和蛋白表达水平的变化