rscs移植联合cop-1免疫治疗对青光眼模型鼠rgcs的保护作用

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1、分类号UDC博士学位论文密级RSCs移植联合COP．1免疫治疗对青光眼模型鼠RGCs的保护作用Neuro．orotectionofretinalstem,llsretinalstemcellst‘ranso’lant‘at。i‘on-0t'●1●■■l一●J●lCOmDlnedWnllCODolymer-IlmmUn屹atlOnonretlnalganglioncellofglaucomamodelinrat作者姓名：周霞学科专业：眼科学学院(系、所)：湘雅医院指导老·师：夏晓波教授论文答辩日期丝!兰：兰_7答辩委员会主席中南大学二0一二年五月原创性声明本人声明，

2、所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：避日期：鲨年』月竺日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科

3、学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：燧名：坠丝吼业』月兰日本课题在医学遗传学国家重点实验室完成中文摘要第一章鼠青光眼模型的建立和视网膜干细胞的培养及鉴定目的：建立鼠慢性青光眼模型，观察各组鼠眼压的变化。培养视网膜干细胞(retinalstemcells，RSCs)，鉴定并观察其分化特点。方法：取正常成年SD大鼠，采用532．二极管激光行270。角膜缘血管网及三条浅层巩膜静脉光凝，建立鼠慢性青光眼模型。取正常成年SD大鼠眼球，仔细分离出睫状体边缘区的视网膜组织块(包括色素组织)，消化成单细胞悬液后

4、置于含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)、B27的无血清培养液中进行干细胞培养，免疫细胞化学染色鉴定细胞的表型及分化特征。结果：成功建立21只大鼠慢性青光眼模型，在激光光凝后14d，眼压达最高峰，其平均值为31．64-3．2mmHg，对侧对照眼为16．84-1．7mmHg(P

5、细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达阳性。结论：采用532二极管激光角巩膜缘血管网及浅层巩膜静脉光凝能成功升高鼠眼内压，建立大鼠慢性青光眼模型；睫状体边缘区的视网膜组织块消化培养法能成功地培养出成年鼠RSCs，且RSCsn⋯v,分化成神经元和胶质细胞。第二章RSCs移植和COP一1联合治疗后青光眼模型鼠IFN-y的表达差异目的：探讨RSCs移植和多聚物．1(Copolymer-1，COP一1)联合治疗慢性青光眼模型鼠后眼内房水及血中IFN一丫的表达差异，明确RSCs移植和COP．1联合治疗青光眼的机制。方法：采用532二极管激光光凝建立SD大鼠慢性青光眼模型

6、，实验分为六组：①PBS伊BS治疗组：青光眼模型鼠后足皮下注射PBS，七天后玻璃体腔内注射PBS；(室)PBS／RSCs治疗组：青光眼模型鼠后足皮下注射PBS，七天后玻璃体腔内注射携带绿色荧光蛋白报告基因的慢病毒载体(Lentivims．GFP+)转染的RSCs；③PBS／COP．1治疗组：青光眼模型鼠后足皮下注射0．2mgCOP．1，七天后玻璃体腔内注射PBS；(至)RSCs／COP．1治疗组：青光眼模型鼠后足皮下注射0．2mgCOP．1，七天后玻璃体腔内注射Lentivirus．GFP+转染的RSCs；⑤青光眼模型组：不做任何治疗；⑥正常对照组。采用ELISA

7、检测各组眼内房水及血中IFN．Y含量；并采用hoechst染色观察各组视网膜神经节细胞(retinalganglioncells，RGCs)的凋亡情况。采用免疫组织化学及全视网膜铺片观察移植的RSCs的融合情况。结果：RSCs／COP．1治疗组较其它组房水及血中IFN．Y的含量明显减低(尸

8、FN．Y含