mir-342、mir-210及meis1基因对急性早幼粒细胞白血病细胞系nb4的作用及机制探讨二甲双胍对急性早幼粒细胞白血病细胞作用的研究

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1、博士学位论文学校代码：学号：miR-342、miR-210及MEISl基因对急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4的作用及机制探讨二甲双胍对急性早幼粒细胞白血病细胞作用的研究所院：姓名：指导教师：导师小组：学科专业：研究方向：完成时间：血液学研究所怀磊王建祥教授王敏教授、饶青副教授内科学白血病发病机制2012年5月中国医学科学院北京协和医学院(清华大学医学部)博士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．第一部分miR一342和miR．210对急性早幼粒细胞白血病细胞系N

2、B4的作用及机制探讨⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．—1．￡．—jL一日IJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．乒士田}日木⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．第二部分MEISl基因下调对急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．—^—￡一——!一刖吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯．结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．讨{念⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．第三部分二甲双胍对急性早幼粒细胞白血病细胞作用的研究．—1．￡一——L日

4、J舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯

5、⋯⋯．．攻读学位期间发表的文章题录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24789263234567356789l367834568O中国医学科学院北京协和医学院(清华大学医学部)博士学位论文中文摘要第一部分miR一342和miR一210对急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4的作用及机制探讨本研究旨在探讨miR-342和miR一210在全反式维甲酸(ATRA)诱导APL细胞系NB4分化中的作用，并寻找可能的靶基因，探索miRNA作用的分子机制。采用脂质体

6、转染法将miR-342和miR-210的前体小分子转染NB4细胞，流式细胞术分析miR．342矛I]miR．210对NB4细胞分化的影响。应用ATRA处理NB4细胞，实时定量PCR法和Westernblot检NmiR．342和miR．210的预测靶基因MEISl的表达变化。构建含MEISl3’非编码区(3’一UTR)的荧光素酶报告基因质粒，与miR．342和miR-210的前体小分子共转染，双荧光素酶报告基因系统检狈,JJmiR．342和miR-210是否靶向MEISl基因。结果表明，miR-342能促进ATRA介导的NB4细胞的分化，而miR一

7、210对NB4细胞没有促分化的作用。全反式维甲酸(ATRA)能降低MEISl蛋白的表达水平，但不能降低MEISlmRNA的表达水平。双荧光素酶报告基因系统显示，MEISl不是miR．342和miR．210的靶基因。结论：miR一342台g促进ATRA介导的NB4细胞的分化，但MEISl不是miR．342和miR．210作用的靶基因；MEISl基因有可能在APL细胞分化中发挥重要作用。关键词微小RNA；急性早幼粒细胞白血病：NB4细胞；MEISl基因；细胞分化第二部分MEISl基因下调对急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞的影响MEISl基因是一种

8、与造血调控、胚胎发育以及白血病发生密切相关的同源盒基因分支基因(Non—HOX基因)，在急性髓系白血病中高表达。本研究旨在探讨MEISl在急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4中的表达情况，通过基因下调研究其对细胞生物学特性的影响及在白血病发生发展中的作用。采用shRNA干扰MEISl的表达，实时定量PCR法和Westernblot观察MEISl表达水平的变化；MTT法检测细胞增殖情况；集落形成实验分析细胞集落形成能力的改变；流式细胞术检测细胞凋亡、分化及对细胞周期的影响。结果表明，MEISl在NB4细胞中高表达；shRNA干扰MEISl在NB4中的表

9、达后，抑制细胞增殖，降低细胞的集落形成能力，促进细胞凋亡，但不影响细胞分化状态以及周期改变。结论：MEISl基因表达改变可以影响NB4细