hpv与色素改变性皮肤疾病之间的关系研究

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1、分类号R71密级公开UDC硕士学位论文HPV与色素改变性皮肤疾病之间的关系研究学位申请人：陈国仙学科专业：妇产科学指导教师：肖长义教授二○一二年五月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineStudyontheRelationofHPVandthePigmentAlterationDiseaseofSkinGraduateStudent:ChenGuoXianMajor:Gynaec

2、ologyandObstetricsSupervisor:Prof.XiaoCHangyiChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMay2012三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。

3、学位论文作者签名：日期：三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认：我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果。学位论文作者签名：日期：I三峡大学硕士学位论文内

4、容摘要目的：本课题研究目的是在前人的研究基础之上，收集脂溢性角化病和色素痣的临床标本，提取总DNA，应用HPV特异型和通用型引物对进行扩增，检测标本中某些型别HPVDNA的存在与否，制作石蜡切片，应用两种针对HPVL1蛋白的抗体进行免疫荧光试验，检测标本中HPVL1蛋白的存在与否，从基因和蛋白两个水平研究脂溢性角化病和色素痣皮损中HPV的存在情况，及其存在与病损的发生有无相关性。方法：(1)收集脂溢性角化病和色素痣石蜡标本，确定其临床诊断和病理诊断，将同一标本分成两部分，一部分以4um厚连续切片，捞片，另外一部分以1

5、0um厚连续切片，5片，装入1.5ml的EP管中；(2)对所有标本提取总DNA，采用PCR方法检测HPV病毒基因的存在与否，确定HPVDNA阳性检出率；(3)对相同的所有标本以本课题组所制备的兔抗HPVL1多克隆抗体及购买的小鼠抗HPVL1单克隆抗体为一抗进行免疫荧光检查，检测组织中HPVL1蛋白的存在情况及阳性检出率；(4)采用统计学软件，综合分析以上实验结果，确证脂溢性角化病和色素痣中HPV的存在情况，探讨HPV在上述疾病发病机制中所发挥的作用。结果：(1)共收集脂溢性角化病石蜡标本46例，色素痣52例；(2)P

6、CR中，对所有标本提取总DNA后均进行β－globin基因扩增，脂溢性角化病阳性者38例，色素痣阳性者44例，对所有β－globin基因扩增阳性的标本进行HPV16E6，HPV18E6++扩增后再进行HPVL1通用型引物对MY09/11，GP5/6扩增，每个引物扩增重复两遍，结果38例SK中有一例HPV16DNA弱阳性，检出率为2.63%，其余标本全部为阴性；(3)脂溢性角化病标本进行免疫荧光检测，兔抗HPVL1多克隆抗体为一抗时，阳性部位主要在上皮未角化部，阳性者共24例，HPVLI蛋白检出率为63.16%，鼠抗H

7、PVL1单克隆抗体为一抗时，阳性主要表达在上皮角化层及真皮角化珠内，阳性者共20例，HPVLI蛋白检出率为52.63%。色素痣标本进行免疫荧光检测，兔抗HPVL1多克隆抗体为一抗时，阳性主要表达在上皮未角化部及汗腺内，阳性者共22例，HPVLI蛋白检出率为50.00%，鼠抗HPVL1单克隆抗体为一抗时，阳性主要表达在上皮角化层及毛囊内，阳性者共20例，HPVLI蛋白检出率为45.45%；(4）统计学分析显示，脂溢性角化病和色素痣标本中HPVDNA检出率与HPVL1蛋白检出率的差异有统计学意义。结论：(1）本实验中脂溢

8、性角化病标本中除HPV16外其他的HPVDNA的检出++率为零，由于HPVL1通用型引物MY09/11，GP5/6扩增型别是有限的，是否有其他型别HPVDNA的存在需要进一步证实，但是HPVLI蛋白的检出率较高，分析得出HPV尤其是高危型与其发病机制不相关，某些皮肤型HPV可能在组织中存在。(2)II三峡大学硕士学位论文色素痣石蜡标本中基因和蛋