etnbse-pdt对成纤维细胞增殖和tgf-β1分泌的影响及信号通路研究

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1、分类号UDC密级编号十南大学CENTRALSoUTHUNIVERSITY硕士学位论文论文题目：EtNBSe．PDT对成纤维细胞增殖和TGF一131分泌的影响及信号通路研究学科、专业：研究生：导师姓名及其专业技术职称：中南大学二O一二年五月分类号UDC硕士学位论文密级EtNBSe．PDT对成纤维细胞增殖和TGF—1311分泌的影响及信号通路研究TheresearchofEtNBSecombinedwithphotodynamictherapyontheimpactoffibroblastproliferationandTGF—p

2、1secretionandonsignalingpathway研究生：高冯学科专业：皮肤病与性病学学院：湘雅三医院导师：黄进华教授中南大学二O一二年五月＼飞扼f原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：函：鱼吼卫年』月手日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学

3、有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。坜醐：一链月{日中文摘要目的1．观察EtNBSe．PDT对体外培养的成纤维细胞增殖活性及TGF．131分泌的影响。2．观察EtNBSe．PDT对体外培养成纤维细胞内MAPK家族成员ERK、JNK、P38活性影响和信号蛋

4、白的时相性变化，以及抑制剂干预中磷酸化表达水平的影响。方法1．分离培养正常人包皮成纤维细胞，采用角蛋白和I、ⅡI型胶原染色进行成纤维细胞的鉴定。2．采用梯度红光照射、梯度EtNBSe浓度和EtNBSe联合红光照射处理成纤维细胞；在抑制剂干预研究中，应用ERK、JNK、P38信号通路特异性抑制剂(PD98059、SP600125、SB203580)分别处理成纤维细胞，四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组成纤维细胞增殖和抑制的变化。3．EtNBSe联合红光照射处理成纤维细胞，酶联免疫吸附(ELISA)法检测TGF．131分泌变化。4

5、．蛋白质免疫印迹(westemblot)法测定磷酸化ERK、JNK、P38的活性及时相性变化；同时观察在抑制剂干预中，磷酸化ERK、JNK、P38的变化。馇里二日木1．体外培养的细胞经I、Ⅲ型胶原染色阳性，角蛋白染色阴性，细胞具有成纤维细胞形态。2．成纤维细胞经梯度红光照射(10、30、60、90min)后，与对照组比较，细胞不产生明显的细胞增殖及细胞毒效应(P>O．05)。在梯度浓度EtNBSe(30、60、120、240pM)分别作用培养1、2h后，各组细胞间未观察到明显的增殖活性和细胞毒反应(尸>O．05)。在梯度EtN

6、BSe(30、60、120、240pM)+红光照射组，梯度EtNBSe处理1h后照光，与对照组比较，对细胞不产生明显的细胞毒反应及细胞增殖活性(P>0．05)；在梯度EtNBSe处理2h后照光，EtNBSe(30、60、120pM)对成纤维细胞有增殖活性，以EtNBSe(60、120pM)增殖活性最明显(P

7、tNBSe．PDT处理后，TGF-131分泌均增加(氏O．05)，以120pM更明显。4．浓度组：与对照组比较，30、60．120pMEtNBSe．PDT可促进磷酸化ERK蛋白的活化；30、60pM可促进磷酸化JNK和P38蛋白的活化，随着剂量的增加逐渐抑制两者的活性。时间组：ERK、JNK、P38均有不同程度的活化，与对照组比较，ERK在60分钟时达到峰值；JNK和P38在90分钟时达到峰值。干预组：与对照组比较，PD98059、SB203580可显著抑制磷酸化ERK、P38的活性；SP600125对磷酸化JNK抑制作用不明

8、显。结论II1．EtNBSe．PDT可促进体外培养的成纤维细胞的增殖，诱导TGF-p1分泌的增加。2．EtNBSe．PDT可影响体外培养的成纤维细胞内MAPK家族成员(ERK、JNK、p38)的活性，其中对JNK、p38具有双向性作用。关键词光动力疗法，成纤维细胞，细胞增殖，