cox-2表达与食管鳞状细胞癌放射敏感性的基础与临床研究

《cox-2表达与食管鳞状细胞癌放射敏感性的基础与临床研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、郑州大学博士学位论文cox--2表达与食管鳞状细胞癌放射敏感性的基础与临床研究姓名：吴慧申请学位级别：博士专业：肿瘤学指导教师：樊青霞201205中文摘要Cox-2表达与食管鳞状细胞癌放射敏感性的基础与临床研究前言研究生吴慧导师樊青霞郑州大学第一附属医院肿瘤科河南郑州450052食管癌是十大恶性肿瘤之一，我国发病率据世界首位，发病人数占全世界的50％以上。约60％以上的患者就诊时为中晚期，这些患者的治疗主要是以放射治疗为主的综合治疗，放射治疗已成为中晚期食管癌的主要治疗手段之一。中国食管癌的主要病理类型是鳞癌，

2、属中度放射敏感性肿瘤，单纯放疗5年生存率仅10"20％，多数患者死于肿瘤局部未控和复发。寻找放疗敏感性的分子标志物，预测食管癌放射敏感性，探讨食管癌放疗抗拒性的机制，提高肿瘤局部控制率是本研究的主要目的。研究表明Cox．2可作为评估肿瘤对放射治疗是否抵抗的一个指标，在肿瘤组织中Cox．2蛋白的表达水平越高，其放射敏感性越差。Cox．2基因表达水平的高低与放射治疗疗效之间的关系在头颈部肿瘤的治疗方面有不少报道，但在食管癌方面研究甚少。本研究通过分析76例食管癌患者近期放疗疗效与肿瘤组织中Cox．2表达水平，探讨C

3、ox．2表达与食管鳞状细胞癌放射抗拒性的关系；通过构建Cox-2特异性siRNA重组质粒和Cox．2表达载体，转染人食管癌EC9706细胞，分别下调和上调Cox．2基因表达，再联合不同剂量的X射线照射，观察放射结合Cox-2基因调控对细胞增殖、细胞周期、凋亡、细胞侵袭能力和放射敏感性的影响，并初步探讨沉默Cox．2基因表达的放射增敏机制；通过观测荷瘤裸鼠经放射线照射后瘤体体积的变化，从活体水平来评价双向调控Cox．2基因表达对放射线中文摘要的增敏作用，为基因治疗联合放射治疗的临床应用提供理论基础和实验依据。材料

4、与方法1．单纯采用放射治疗的76例食管鳞癌患者。2．采用免疫组织化学SP法分别检测76例食管鳞癌组织中Cox．2的表达水平。并检测其中20例患者正常食管黏膜组织中Cox．2蛋白的表达。用统计学软件SPSSl3．0对实验数据进行统计学处理，观察食管鳞癌组织中Cox．2蛋白表达水平与放疗抗拒性的关系。3．针对人Cox．2基因mRNA序列，构建2个siRNA重组质粒：pRNA．U6．1．sieox214和pRNA．U6．1．sicox799，同时构建Cox．2表达载体和1个无关序列siRNA，利用脂质体转染技术转入人

5、食管癌EC9706细胞，(3418筛选得到稳定转染细胞株。同时设立转染无关序列siRNA组、空载体对照组和未转染组。4．0Gy、2Gy、40y射线照射，应用荧光定量RT-PCR检测细胞中Cox．2、MMP2、Bax、Bel．2的表达水平；Westernblot检测Cox．2蛋白及AKT蛋白和磷酸化AKT蛋白(pAKT)的表达。5．流式细胞术检测EC9706细胞周期和细胞凋亡率，比较各实验组经0、2、40y射线照射后细胞周期以及凋亡率的变化；6．通过Transwell侵袭小室实验检测双向调控Cox-2表达联合射线

6、照射对食管鳞癌细胞侵袭活性的影响。7．CCK8实验和克隆形成实验检测不同剂量射线照射对细胞增殖能力和存活分数的影响。8．建立稳定转染的EC9706细胞株裸鼠移植瘤模型，观测荷瘤裸鼠经20Gy射线照射后瘤体体积的变化，从体内实验进一步探讨双向调控Cox．2表达对食管鳞癌组织放射敏感性的影响。统计学分析采用SPSSl3．0统计学软件对所有数据均进行统计学处理，两变量之间的关系分析用s'pemmaa等级相关分析表示，阳性率之间的比较用矿检验，检验标准以ct=0．05为显著性检验水准。Ⅱ中文摘要结果：1．76例食管癌患

7、者放射治疗结束后1个月做胸部增强CT扫描和食管钡餐造影检查进行疗效评价，其中放射敏感(CR+PR)55例(CR：13例；PR：42例)：NR(21例)放射抗拒。2．免疫组织化学SP法检测证实，正常食管黏膜组织中Cox．2蛋白的表达明显低于食管鳞癌组织，放射抗拒组Cox．2蛋白的表达明显增高，且明显高于放射敏感组(p<0．05)。3．成功构建了2个Cox．2基因siRNA重组质粒和1个Cox．2表达载体，经测序鉴定正确。利用脂质体转染技术成功导入人食管癌EC9706细胞，经G418筛选得到稳定转染的人食管癌EC9

8、706细胞。4．0、2、4C．,y的X射线照射后，荧光定量RT-PCR和Westernblot检测结果显示沉默Cox．2基因表达的EC9706细胞中MMP2mRNA、Bel-2mRNA、AKT蛋白和磷酸化AKT的表达水平均显著降低，且与照射剂量呈反比。BaxmRNA表达水平显著升高，与照射剂量呈正比。而上调Cox．2表达的EC9706细胞中MMP2raRNA、Bel．2mRNA、AKT