1型鸭圆环病毒间接elisa方法的建立及流行病学调查

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2、库》，并向社会公众提供信息服务。保密论文在解密后应遵守此规定。．论文作者签名：羔金导师签名：符号说明目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯IABSTRAcT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．II1前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11．1猪圆环病毒(PORCINECIRCO'v'IRUS，PCV)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．21．1．1病原学特征⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．21．1．2病毒的分子生物学特征⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．1．3流行病学特征⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．51．1．4PCV2

3、的致病机理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．61．1．5诊断方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．1．6PCV的预防控制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．2鸡传染性贫血病毒(CHICKENINFECTIONANAEMIAVIRUS，CAV)⋯⋯⋯⋯⋯101．2．1病原学⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯．．101。2．2流行病学⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．141．2．3检测方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．16】．2．4预防控制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．171．3鸭圆环病毒(DUCKCIRCOVIRUS，

4、DuCV)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯191．3．1病原学特征⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．191．3．2分子生物学特征⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．201．3．3流行病学特征⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．221．3．4诊断方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．221．4本研究的目的与意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯242材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．252．1检测基因1型DuCV抗体的间接ELISA方法的建立及血清学调查⋯⋯．252．1．1菌种和质粒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．252．1．2主要试剂和仪器⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．252．1．3聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．252．1．4用于蛋白纯化的溶液的配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯262。l，5ELtSA所用溶液⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．262．1．6引物设计与合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．272．1．7LJ07株Cap基因原核表达载体的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯272．1．8SDS—PAGE⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．272．1．9重组质粒在大肠丰T菌中的诱导表达和WesternBlot分析⋯⋯⋯．．282．1．10重组蛋白的变、复性及其纯化

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯282．1．11间接ELISA条件的优化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯292．1．12间接ELISA的操作程序和结果判定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．302．1．13进行Westernblot符合率的验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．302．1．14间接ELISA方法的初步应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．302．22011年山东部分地区肉鸭鸭群基因2型DuCV血清学调查⋯⋯⋯⋯．．312．2．1血清、菌种、质粒及主要试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．312．2．2重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达和WesternBlot分析⋯⋯⋯⋯3l2．2．3重组蛋白的

7、变性、复性及其纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3l2．2．4iELISA检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．3l3结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．333．1检测基因1型DuCV抗体的间接ELISA方法的建立及血清学调查⋯⋯．．333．1．1DuCVCap基因的克隆与鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯333．1．2表达产物的分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．333．1．3间接ELISA最佳反应条件的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯343．1．4Westernblot符合率的验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯353．1．5间接ELISA方法的初步应用⋯

8、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．363．22011年山东部分地区肉鸭鸭群基因2型DuCV血清学调查⋯⋯⋯⋯．．373．2．1表达产