nk细胞分泌il-10、tgf-β水平和hiv疾病进展关系的研究

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1、‘中文论著摘要·NK细胞分泌IL一10、TGF—P水平与HIV疾病进展关系研究目的获得性免疫缺陷综合征(acquiredimmunodeficiencysyndrome，AIDS)又称艾滋病，是由人类免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiencyvirus，HIV)感染引起的以CD4+T细胞显著减少为主要特征，最终伴有反复机会性感染、恶性肿瘤而导致死亡的感染性疾病。在HIV感染过程中，天然免疫和获得性免疫系统一方面受到病毒感染的损害，细胞数量和功能发生变化，另一方面依旧发挥抗病毒的作用，抑制病

2、毒复制。自然杀伤细胞(naturalkillercell，NK)是天然免疫系统中的重要效应细胞，可直接杀伤肿瘤或病毒感染的细胞，在机体早期控制肿瘤和病毒感染中发挥重要作用。研究表明NK细胞也具有免疫调节功能，主要通过与其他免疫细胞如T、DC、巨噬和内皮细胞等相互作用及分泌细胞因子与趋化因子两种方式发挥免疫调节作用。最近研究发现NK细胞可通过分泌免疫调节性细胞因子白细胞介素10(interleukin一10，IL．10)、转移生长因子(transforminggrowthfactor-D，TGF．p)调节

3、自身及其他免疫细胞反应。目日订研究只发现正常人NK细胞在体外刺激下，可以分泌IL．10、TGF．D，但足对于HIV感染者NK细胞分泌调节性细胞因子lL．10、TGF．D情况，及其与HIV疾病进展的关系，国内外尚未报道。本研究以感染HIV的男¨j州tE恋人群为研究埘缘，心J『j多色流』弋细胞分析技术，探讨HIV感染哲NK细胞分泌IL．10和TGF．p情况以及勺HIV感染疾病进展之fHJ的关系。方法．1、研究对象29例HIV抗体阳性感染者，未接受过抗病毒治疗，且无明显机会性感染。12例诈常对照(HIV-ne

4、gativenormalcontrol，NC)，HIV抗体阴性，血常规及肝肾功1正常，无免疫系统疾病。本研究内容获得参加者的书面知情同意。2、CD4+T细胞绝对值检测将200'1BD公司CD4．FITC／CD8．PE／CD3．PerCP试剂加入绝对计数管中，逆向加样法加入500'1混匀的抗凝全血，室温避光15rain，加入1×免洗溶血素4500,1，室温避光15min，应用FACSCalibur流式细胞仪进行检测，MultiSET软件分析结果，得到CD4+T淋巴细胞的绝对值。3、NK细胞百分比及其分泌I

5、L．10、TGF．13的检测密度梯度离心法提取外周血单个核细胞：加或不加rIL．12(10ng／m1)与rlL．15(50ng／m1)刺激PBMC，l小时后加GolgiStop，37"(2，5％C02共孵育培养6小时；用PBS洗涤PBMC后，加抗体CD3一Percp与CD56．PE．cy7进行表面避光染色，40C，30分钟；使用BDCytofix／CytopermTMFixation／PermeabilizationKit进行破膜20分钟，洗涤细胞后，用IL．10．APC和TGF．p．PE胞内避光染色，

6、4℃，30分钟：洗涤细胞后用1％多聚甲醛固定。应用FACSLSRII流式细胞仪进行检测，BDFACSDivaTM软件分析结果。4、IL．10、TGF．p对NK细胞功能影响的测定分别采用重组IL．10、TGF．13与PMBC共培养6小时、24小时、48小时，直接标记CDl07a-PE，在收细胞前5小时加GolgiStop(美国BD公司)，37*(2，5％C02共孵育培养；用PBS洗涤PBMC后，加抗体CD3．Percp与CD56．Pe．ey7(美国BD公司)进行表面避光染色，4"C，。30分钟：使用BDC

7、ytofix／CytopermTMFixation／PermeabilizationKit(美幽BD公司)进行破膜20分钟，洗涤细胞后，用IFN．丫．APC(荚固BD公司)胞内避光染色，4℃，30分钟；沈涤细胞后用1％多聚IlI醛Ⅲ定。应jfjIFACSLSRII流J=℃细胞仪进行检测，BDFACSDivaTM软件分析结果。5、HIV病毒载量测定取1mIEDTA抗凝血浆，采用Roche公司COBAS⑩AmpliPrep⑧／COBAS@TaqMan@System自动载量仪上以实时荧光定量PCR方法测定病毒

8、载量。全部操作按照操作说明书进行。26、统计学分析应用SPSSl7．0软件包进行统计分析，所有数据以中位数表示，两组问实验指标的比较采用Mann-WhitneyU检验，相关性分析采用Spearman秩相关检验，P<0．05为有统计学意义。。结果一、HIV感染者NK细胞及各亚群分泌IL．10、TGF．P的特点1、HIV感染者NK细胞及各亚群构成情况本研究对HIV感染者及正常对照组(NC组)，检测NK细胞及各亚群占淋巴细胞百分比。结果显示：与N