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1、参茸葡萄糖注射液细菌内毒素检查方法研究海口市第三人民医院海南海口571100【摘要】目的:对参茅葡萄糖注射液应用细菌内毒素检查法的可行性探讨。方法：依据《中国药典》2010年版二部附录细菌内毒素检查法，确定参苇葡萄糖注射液的有效稀释浓度和细菌内毒素限值。结果：参茅葡萄糖注射液经稀释6倍后对蛍试剂无干扰作用，细菌内毒素的限值为1.5EU/mlo结论：可用细菌内毒素检查法取代热原检查。【关键词】细菌内毒素；蛍试剂；参茸葡萄糖注射液；干扰试验【中图分类号】R927【文献标识码】B【文章编号】1674-8999（2015）6-0115-01参茸葡萄糖注射液有抗血小
2、板聚集，扩张冠状动脉,降低血液粘度，加速红细胞的流速，改善微循环，并具有抗心肌缺血和心肌梗死的作用，为临床常用药。作为重点检验项目之一的安全性评价，目前仍采用家兔法检查热原。细菌内毒素检查法具有快速、灵敏、操作简便、重现性好的特点，为此参考《中国药典》2010年版二部附录细菌内毒素检查法⑴，应用蛍试剂对参茸葡萄糖注射液进行细菌内毒素检查的可行性研究，提供更为科学的检测方法。1仪器与试药XW-80A旋涡混合器（上海医科大科仪器厂）；蛍试剂（湛江安度斯生物有限公司,批号：1310201,灵敏度0.25EU/ml；福州新北生化工业有限公司,批号：13121112
3、,灵敏度0.25EU/ml）,细菌内毒素检查用水（湛江安度斯牛物有限公司，批号：1402070,内毒素含量&e;0.003EU/ml）,细菌内毒素工作标准品（中国食品检定研究院批号:150601-201377,每支70EU）,参茸葡萄糖注射液（贵州景峰注射剂有限公司,批号：20131003>20131084、20131127）。2方法与结果2.1参苇葡萄糖注射液中细菌内毒素限值（L）确定根据公式L=K/M,其中，K为每公斤体重每小吋最大可接受的内毒素剂量，注射剂K=5.0EU/(kg?h),M为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量［2］。根据参茸葡萄糖注射
4、液批号为20131084的药品检报告质量标准项目中热原检查方法为家兔法，药品说明书得知：参芦葡萄糖注射液用量：静脉滴注100〜200ml/次；参苇葡萄糖注射液临床最大用量成人为200ml,按成人体重60kg计算，代入公式计算参茸葡萄糖注射液的细菌内毒素限值，L=K/M=5.0/(200/60)=1.5EU/mL2.2供试品的最大有效稀释倍数(MVD)市售蛍试剂的灵敏度(λ)在0.5〜0.03EU/ml之间，根据《中国药典》2010年版二部附录“细菌内毒素指导原则”，参芦葡萄糖注射液的有效稀释倍数为3〜50倍,本试验采用灵敏度为0.25EU/m
5、l的蛍试剂,MVD=L/&ambda;二l×(1.5/0.25)二6倍。2.3供试品的干扰初筛试验用BET水将参芦葡萄糖注射液分别稀释成3、6、12、24、50倍的系列浓度，以各稀释倍数的样品将WSE制成2λ、1λ、0.5λ、0.25λ系列浓度的供试品内毒素溶液，与蛍试剂混合进行抑制试验。结果显示，供试品原液和稀释3倍时对部分蛍试剂有抑制作用，当稀释至6倍时无干扰作用，2份样品结果均相同，见表2.4供试品的干扰试验根据干扰初筛试验结果，最小不干扰浓度为6倍样品稀释液。为最终确认是否存在干扰
6、因素的影响，本试验采用6倍样品稀释液进行正式干扰试验。用参芦葡萄糖注射液(BET水6倍稀释液)将WSE稀释制成2λ、lλ、0.5λ、0.25λ系列浓度的供试品内毒素溶液，每一浓度平行做4管，另取BET水和6倍样品稀释液各做4管阴性对照液，依法操作。结果表明,Es均在0.5λ〜2.0λ范围内,且Et也均在0.5Es~2.OEs范围内。说明样品稀释6倍后，对蛍试剂无干扰作用。见表2。2.5供试品溶液的细菌内毒素检测根据干扰试验的结果和拟定的细菌内毒素浓度，取样品3批，分别用BE
7、T水稀释6倍后，采用两个厂家的蛍试剂进行检测，结果均符合规定，见表3。3讨论3.1采用两个厂家的蛍试剂对3个批次的样品进行干扰试验，从初筛试验可以看出，不同厂家的蛍试剂，其特异性各不相同，参茸葡萄糖注射液原液对蛍试剂有干扰作用，稀释3倍液对部分厂家蛍试剂有干扰作用，当样品稀释至6倍吋,可以排除干扰。确定最小不干扰浓度为6倍样品稀释液，细菌内毒素的限值为1.5EU/mL结论：可用细菌内毒素法检查取代热原检查，为确保试验结果的准确可靠，建议实际操作时将样品稀释6倍或采用更高灵敏度的蛍试剂。此试验说明,细菌内毒素检查法可以代替家兔法用于热原检查。3.2减少或排除
8、参茸葡萄糖注射液生产带来的干扰因素：使用超滤法去除细菌内毒素等干扰
