欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:32795072
大小:8.73 MB
页数:80页
时间:2019-02-15
《基质细胞衍生因子sdf-1α%2cc-myc调控基因神经激肽受体1表达的研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的:研究乳腺癌细胞在发生骨转移过程中速激肽(tachykinin)及其受体NKlR表达状况,原癌基因c-myc表达产物如何调控神经激肽受体l(NKIR);基质细胞衍生因子SDFI.n在C.MYC调控基因NKlR表达中所起的作用。方法:1.应用染色质共沉淀试验验证转录因子C.MYC是否作用NKlR基因转录起始点上游含E盒调控序列。2.用巢式PCR和重叠延f0PCR克隆基因NKIR转录起始位点上游序列即启动子,构建野生型和突变型启动子荧光素酶报告基因载体,与内参质粒同时转染乳腺癌细胞,评价野生型和突变型NKlR启动子如何启动下游基因表达。3
2、.构建c-myed',q:扰RNA表达载体,评价C—mye+乘lc-mye一细胞组基因c.myc恭lNKlR表达水平。4.在培养基中iJHSDF.1a中和抗体,评价C.MYC如何调控NKlR基因的表达。结果:1.转录因子C.MYC能够作用基因NKlR转录起始点上游E盒。2.在正常培养条件卞,C.MYC能够通过激活含E盒NKlR启动子而启动下游基因表达。3.在正常培养条件下,转录因子C.MYC能够反式激活NKlR基因的表达。4.在SDF.1a因子缺乏状态下,转录因子C.MYC反式激活NKlR基因表达的能力消失,甚至逆转。结论:转录因子C.MYC能够作用基因NKIR调控区;
3、NKIR基因启动子在C.MYC的调控下能够启动下游基因的表达,C.MYC能调控NKlR基因的表达;SDF.1a因子能够影响转录因子C.MYC调控基因NKIR的表达。关键词t乳腺癌骨转移报告基因载体基因沉默前速激肽原NKlR天津医科人学硕士学位论文AbstractObjective:ToinvestigatetheexpressionofgenetachykininandNKlRinbreastcancefcell.TotesthowtranscriptionfactorC-MYCregulateNKIRexpression.toidentifywhatrolesSDFl
4、一QplayintheprocessofC—MYCregulatingNKIR.Method:1.ChromatinImmunoprecipitationAssaywasemployedfortestingwhetherC-MYCbindstogeneNKlR5’upstreampromoterregion.2.WildandmutationtypeofNKIR5’upstreampromoterregionwasclonedbyNestedPCRandov甜apExtensionPCR.Wildandmutationluciferasereportgenevector
5、swereconstructedandcotransfectedwithreferenceplasmidinMCF一7cell,toevaluatehowwildandmutationNKlRpromoterregulatedownstreamgeneexpression.3.c-mycshRNAvetorforgeneinterferencingwasconstructed,todeterminetheNKIRandc-mycexpressionlevelinc-myc-andc-myc+cellgroup.4.NeutralantibodySDF.1awasused
6、forremovingbreastcellautocrineSDF-lacytokineinculturemedia,underthiscondition,assessC·MYCregulateNKlRexpression.Result:1.TranscriptionfactorC.MYCcanbindto5'upstreamE-boxofNKIRgene.2.Undernormalculturecondition,C-MYCCantransactivategenesexpressiondownstreamofNKlRpromoter.3.Undernormalcult
7、urecondition,C—MYCCantransactivategeneNKlRexpression.4.IIlmeabsenceofSDF.1acytokine,C-MYCcannottransactivateNKIRexpression.Conclusion:TranscriptionfactorC.MYCCanaffectNKlRpromoterregion;NKIRpromoterCallactivateitsdownstreamgeneexpressionbyC·MYCbinding.C—MYCCanregulategene
此文档下载收益归作者所有