基质细胞衍生因子sdf-1α%2cc-myc调控基因神经激肽受体1表达的研究

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1、天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：研究乳腺癌细胞在发生骨转移过程中速激肽(tachykinin)及其受体NKlR表达状况，原癌基因c-myc表达产物如何调控神经激肽受体l(NKIR)；基质细胞衍生因子SDFI．n在C．MYC调控基因NKlR表达中所起的作用。方法：1．应用染色质共沉淀试验验证转录因子C．MYC是否作用NKlR基因转录起始点上游含E盒调控序列。2．用巢式PCR和重叠延f0PCR克隆基因NKIR转录起始位点上游序列即启动子，构建野生型和突变型启动子荧光素酶报告基因载体，与内参质粒同时转染乳腺癌细胞，评价野生型和突变型NKlR启动子如何启动下游基因表达。3

2、．构建c-myed',q：扰RNA表达载体，评价C—mye+乘lc-mye一细胞组基因c．myc恭lNKlR表达水平。4．在培养基中iJHSDF．1a中和抗体，评价C．MYC如何调控NKlR基因的表达。结果：1．转录因子C．MYC能够作用基因NKlR转录起始点上游E盒。2．在正常培养条件卞，C．MYC能够通过激活含E盒NKlR启动子而启动下游基因表达。3．在正常培养条件下，转录因子C．MYC能够反式激活NKlR基因的表达。4．在SDF．1a因子缺乏状态下，转录因子C．MYC反式激活NKlR基因表达的能力消失，甚至逆转。结论：转录因子C．MYC能够作用基因NKIR调控区；

3、NKIR基因启动子在C．MYC的调控下能够启动下游基因的表达，C．MYC能调控NKlR基因的表达；SDF．1a因子能够影响转录因子C．MYC调控基因NKIR的表达。关键词t乳腺癌骨转移报告基因载体基因沉默前速激肽原NKlR天津医科人学硕士学位论文AbstractObjective：ToinvestigatetheexpressionofgenetachykininandNKlRinbreastcancefcell．TotesthowtranscriptionfactorC-MYCregulateNKIRexpression．toidentifywhatrolesSDFl

4、一QplayintheprocessofC—MYCregulatingNKIR．Method：1．ChromatinImmunoprecipitationAssaywasemployedfortestingwhetherC-MYCbindstogeneNKlR5’upstreampromoterregion．2．WildandmutationtypeofNKIR5’upstreampromoterregionwasclonedbyNestedPCRandov甜apExtensionPCR．Wildandmutationluciferasereportgenevector

5、swereconstructedandcotransfectedwithreferenceplasmidinMCF一7cell，toevaluatehowwildandmutationNKlRpromoterregulatedownstreamgeneexpression．3．c-mycshRNAvetorforgeneinterferencingwasconstructed，todeterminetheNKIRandc-mycexpressionlevelinc-myc-andc-myc+cellgroup．4．NeutralantibodySDF．1awasused

6、forremovingbreastcellautocrineSDF-lacytokineinculturemedia,underthiscondition，assessC·MYCregulateNKlRexpression．Result：1．TranscriptionfactorC．MYCcanbindto5'upstreamE-boxofNKIRgene．2．Undernormalculturecondition，C-MYCCantransactivategenesexpressiondownstreamofNKlRpromoter．3．Undernormalcult

7、urecondition，C—MYCCantransactivategeneNKlRexpression．4．IIlmeabsenceofSDF．1acytokine,C-MYCcannottransactivateNKIRexpression．Conclusion：TranscriptionfactorC．MYCCanaffectNKlRpromoterregion；NKIRpromoterCallactivateitsdownstreamgeneexpressionbyC·MYCbinding．C—MYCCanregulategene