基质细胞衍生因子-1α及其受体在糖尿病大鼠心肌病变中的表达及意义.doc

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1、基质细胞衍生因子-1a及其受体在糖尿病大鼠心肌病变中的表达及意义基质细胞衍生因子Ta及其受体在糖尿病大鼠心肌病变中的表达及意义林安华雷闽湘谢晓云徐寒松摘要：目的观察糖尿病大鼠心肌病变与基质细胞衍生因子-la(SDF-ld)及其受体(CXCR-4)的关系。方法以链服佐菌素(STZ)诱导建立糖尿病大鼠模型。随机分为1个月病程组(Ml组)、3个月病程组(M3组)、5个月病程组(M5组)。心肌切片后行SDF-la,CXCR-4及血管内皮生长因子(VEGF)免疫组化，抗vWF抗体染色心肌微血管计数，半定量反转录聚合酶链反应(RTPCR)检测SD

2、F-la,CXCR-4及VEGFmRNA在大鼠心肌中的表达水平。结果随着病程的延长，心肌组织中SDF-la,CXCR-4袁达水平逐渐增高，与正常对照组相比，造模后1个月就有增高，5个月时增高最明显，而心肌组织中VEGF表达无明显改变：心肌微血管计数显示造模后5个月心肌内微血管数量明显减少。结论糖尿痛心肌病变时SDF-la/CXCR-4在心肌中的表达水平随糖尿病痛程延长逐步增高，而VEGF表达无明显改变，糖尿病心肌病变时微血管减少可能与VEGF表达不足有关。关键词：糖尿病；心肌病变；基质细胞衍生因子-1ci；CXCR-4；大鼠中图分类号

3、：R587.1R255.4文献标识码：A文章编号：1672-1349(2007)07-0601-03糖尿病心肌病变是由代谢紊乱触发，致心肌细胞凋亡增加，纤维化，岀现心律失常，进行性心功能不全的一种糖尿病慢性并发症，是糖尿病病人死亡主要原因之一，心肌内微血管病变是其主要病理改变。基质细胞衍生因子(stuomalcell-derivedfactor-1ci,SDF-la)是趋化作用细胞因子(chemotaxis)CXC亚族的一员。研究表明，SDF-1a在细胞迁移过程中发挥着重要作用，与血管生成密切相关,通过与其特异性受体CXCR-4结合而

4、发挥趋化作用，促进造血干/祖细胞逆SDF-1浓度梯度移行和增殖，诱导新生血管形成。在研究SDF-1a对人微血管内皮细胞的作用时发现，SDF-1a能促进内皮细胞增殖迁移，并能促进内皮细胞表达血管内皮生长因子（VEGF）,从而促进血管发生，表明SDKla参与了微血管内皮细胞形成新生血管的过程。本研究通过链脉佐菌素（STZ）诱导建立糖尿病心肌病变动物模型，应用免疫组化和RT-PCR方法研究糖尿病心肌病变心肌SDF-1a,CXCR-4及VEGF的表达，探讨糖尿病心肌病变可能的发病机制。1材料与方法1.1材料雄性SD大鼠60只，体量200g±2

5、0g,由中南大学医学动物部提供；链）R佐菌素（Streptozotocin,美国Sigma公司）；罗氏血糖仪及试纸；SDF-1a,CXCR-4,VEGF及抗vWF单抗（武汉博士徳公司）；S-P试剂盒（北京中杉金桥公司）；Trizol和反转录试剂盒（Invitrogen公司）;Taq酶（大连Takara公司）;引物（上海生物匸程公司合成）；PCR扩增仪（德国Biometra公司）；UVI.pro凝胶成像与分析系统（华粤公司）。1.2方法实验大鼠随机分成正常对照组（NC组）和糖尿病（DM组），每组乂分3个亚组，即1个月组（Ml组）、3个月

6、组（MS组）、5个月组（M5组）各10只。禁食12h后，用新鲜配置0.lmmol/L.pH4.5的枸掾酸盐缓冲液稀释STZ（10.g/L）,以60mg/kg一次性腹腔内注射诱导建立糖尿病大鼠模型，正常组以等体积枸椽酸盐缓冲液一次性腹腔内注射。Id及3d后尾静脉采血测血糖216.7nunol/L确定模型并纳入试验。每5d测大鼠体重、血糖1次，普通颗粒饲料喂养，自由饮水。分别于造模后1个月、3个月、5个月末称体重、测空腹血糖后处死大鼠，取心脏组织应用免疫组化S-P法检测心肌组织SDF-1a,CXCR-4及VEGF的表达。抗vWF抗体染色心

7、肌微血管计数，第VIII因子相关抗原在血管内皮细胞表达，应用免疫组化S-P法对各组大鼠心肌组织中第VH【因子相关抗原进行测定，参照Weidner法计数心肌微血管(MV)。取心肌置于去PdNA酶的冻存管液氮屮保用于Trizol提取心肌总RNA,测定纯度及含量。1.3统计学处理釆用SPSS11.5进行统计学分析，结果以均数土标准差(x土s)表示，采用成组设计资料两样本均数比较t检验。2结果2.1一般状况观察结果DM大鼠均成模，无血糖返回正常现象，食量、饮水量及尿量均显著增加，同时体质量增长缓慢，并出现皮毛枯黄、皮下脓肿等。NC组大鼠无死亡

8、，DM组大鼠在M3组、M5组各死亡1只。1.2心肌微血管密度(MVD)计数第VDI因子相关抗原在血管内皮细胞表达，阳性点在光镜下为单个或呈团块、柱状或已分化成管腔状的内皮细胞，细胞质呈棕黄色至棕褐色，糖尿病大鼠心肌微血管