资源描述：
《局部热应激预处理对肝脏缺血／再灌注损伤的防护作用的机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、局部热应激预处理对肝脏缺血/再灌注损伤的防护作用的机制中国应用牛理学杂志2005;21(3)局部热应激预处理对肝脏缺血/再灌注损伤的防护作用的机制秦丽娟，曹宇(1•中国医科人学生理学教研室,i［宁沈阳110001;2内蒙古医学院生理教研室，内蒙古呼和浩特010059)285摘要目的:探讨热应激预处理诱导产生的热休克蛋白70对肝脏缺血/再灌注损伤的保护作用的机制•方法:应用Dringle.s法制备肝脏缺血/再灌注损伤模型及热应激预处理模型.将实验人鼠随机分为热应激预处理(HP+I/R)组与非预处理(I/R)组,对比观察两组动物肝脏缺血/再灌注后0,4,&12,24h时肝脏HSP70的
2、表达,SOD活力和MDA的产生量及大鼠血清门冬氨酸转氨酶(aspartatetransaminase,AST),丙氨酸转氨酶(alaninetransaminase,ALT)的活性与肝脏病理组织学改变.结果:热应激预处理组各吋间点肝脏HSP70的表达及SOD的活力均比非预处理组同一时间点高.而血清AST,ALT酶活性及MDA的产生量较菲预处理组低,病理损伤也比非预处理组减轻.结论:热应激预处理诱导产生的热休克蛋白70可能通过促进SOD的产生，从而降低氧自由基对肝脏的损害，起到保护肝脏缺血/再灌注损伤的作用.关键词:HSP70;SOD;缺血/再灌注损伤;肝脏中图分类号:R657.3文
3、献标识码:A文章编号:1000—6834(2005)03—0285—04热休克蛋白70(heatshockprotein70,HSP70)是机体在受到应激刺激时产生的一种内源性保护性蛋口质，能提高细胞耐受力11.HSP70在肝脏缺血/再灌注中的保护作用已被证实14,但其保护作用的确切机制至今尚不清起.本实验制备了大鼠热应激预处理与非预处理动物模型，对比观察了两组动物肝脏缺血/再灌注后不同时间点肝脏HSP70的表达,SoD活力和MDA的产生量，血清AST,AUT活性及肝脏病理组织学改变，以探讨热应激预处理诱导产生的HSP70对肝脏缺血/再灌注损伤的保护作用机制.1材料与方法1.1动物
4、及分组选用Wistar健康雄性大鼠50只(由屮国医科大学实验动物中心提供)，体重200〜250g,随机分为两组(=25):热应激预处理(HP+I/R)组和非预处理⑴组.1.2模型的建立HP+I/R组:大鼠实验前禁食12h,自由饮水，10%乌拉坦腹腔注射麻醉，于剑突下沿腹白线作约1CD1的切口暴露肝脏,将温度传感器探头包埋于肝左外侧叶下,外接二道生理记录仪(LMS一2B型，成都仪器厂)描记肝脏温度变化,用电吹风对肝脏进行局部加热约15min使肝脏温度达(42±0.5)°C,维持15min后停止加热，关闭腹腔•动物恢复12h后进行缺血/再灌注模型制备(模型制备同I/R组，见下述).I/
5、R组:动物饲育条件及手术过程同前，不进行局部加热，只暴露肝脏30min后关闭腹腔.恢复12h后再次用10%乌拉坦腹腔注射麻醉，沿腹正中切口切开腹部,游离肝门韧带，用无损伤血管夹夹闭肝蒂使肝脏缺血30min,去夹恢复血流进行再灌注.两组动物分别于再灌注后0,4,&12,24h时取肝脏左外侧叶于一70°C冰箱保存，准备测定SOD活力和MDA含量;另取小块肝左外侧叶用10%中性福尔马林固定，准备测定HSP70表达;腹主动脉取血2ml,37°C恒温水浴lh后,3000r/min离心5min,取血清于一70°C冰箱保存准备测定血清酶活性.13血清酶活性测定釆集的血清在72h内以全自动牛化分析
6、仪(7600型,FI本)测定血清AST,ALT的活性.1.4肝脏SOD活性,MDA含量的测定采用黄卩票岭氧化酶法测定肝脏S0D活力;硫代巴比妥酸(TBA)法测定肝脏MDA含量•具体操作按照南京建成牛物工稈研究所提供的试剂盒说明进行.1.5肝脏HSP70表达的测定采用链霉亲和素一生物素一酶复合物(SABC)法.抗大鼠HSP70抗体购自武汉博士德生物工程有限公司•阴性对照采用PBS代替一抗.1,6病理组织学观察肝脏标本用10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋,切片,HE染色,光镜下观察肝脏病理组织学改变•另取小块肝脏用2.5%戊二醛固定,按透射电镜要求制片，常规铅铀双染色，电镜下观察肝脏
7、组织学改变.*基金项目:国家自然科学基金资助项目(30270198)收稿H期:2003.10—08;修回日期:2004—12—13作者筒介:秦丽娟(1975—)，女(蒙)，内蒙古赤峰人，助教硕士从事环境生理及体温生理研究•通讯作者1.7统计学处理数据以均数土标准差(土S)表示，采用Excel软件进行方差分析,t检验.2结果2.1各组大鼠血清AST活性的变化I/R组与HP+I组血清AsT活性在缺血/再灌注后的0〜24h观察期间内均随缺血后再灌注时间的延长而升高，但HP+
