转化生长因子β1基因转染人骨髓间充质干细胞体外的构建组织工程心脏瓣膜实验地地研究

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1、Adadenovims缩略词表Ad．TGF—pladenovirusvectorencodingTGF一131geneBMNCsbonemarrowmononuclearcells腺病毒携带TGF—pl基因的腺病毒载体骨髓单个核细胞BMSCsbonemarrowmesechymalstemcells骨髓间充质干细胞cDNADMEMDMSoDCAGFPEDTAFCSFn．CBDMTTMOIODPBSpfuPAGEIU’．PCRSEMSDSTEHVTGF—plTPCcomplementarydeoxyribonuclei

2、cacidDulbecco’Smodifiedeagle’Smediumdimethylsulfoxidedeoxycholicacidgreenfluorescentproteinethylenediaminetetra-aceticfetalcalfserumcarboxy--terminalcell--bindingdomainoffibronectinthiazolylbluemultiplicationofinfectionopticaldensityphosphatebufferedsalineplaqu

3、eformingunitpolyacrylamidegelelectrophoresisreversetranscriptionpolymerasechainreactionscanningelectronmicroscopysodiumdodecylsulfatetissueengineeringheartvalvetransforminggrowthfactor131terminalprotoncomplex互补脱氧核糖核酸改良Eagles培养液二甲基亚砜脱氧胆酸绿色荧光蛋白乙二胺四乙酸胎牛血清纤维连接蛋白羧基端

4、细胞结合域噻哗蓝感染倍数光密度磷酸盐缓冲液噬斑形成单位聚丙烯酰胺逆转录多聚酶链反应扫描电镜十二烷基磺酸纳组织工程心脏瓣膜转化生长因子B1末端蛋白复合物独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者签名：签字日期：2008年05月06日学位论文版权使用授权书声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学

5、位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：导师签名：侈玉签字日期：2008年05月06日签字日期：2008年05月06日转化生长因子Dl基因转染人骨髓问充质干细胞体外构建组织工程心脏瓣膜的实验研究摘要一、背景和目的组织工程器官研究包括种子细胞、瓣膜支架材料以及瓣膜组织的形成和再生构成三大部

6、分。组织工程心脏瓣膜(tissueengineeringheartvalve，TEHV)的体外构建首先要将种子细胞成功地种植到瓣膜支架上。细胞和支架之间的相互作用，包括细胞在支架上迁移、分化和增殖等生物活动，都是以细胞和支架的黏附为基础。细胞与瓣膜支架材料的相互作用一直是THEV研究的重要领域，其核心是种子细胞在支架材料上的黏附。目前所使用的瓣膜支架材料有人工合成材料和天然材料，人工合成材料包括聚乳酸(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚羟基烷酸酯类(PHAs)、聚己酸内酯(PCL)及其共聚物等人工合成高分子材料。天然材

7、料包括异种瓣膜支架和同种异体瓣膜支架。但这些材料大多属于生物峋隋性”材料，不能为种子细胞的附着和生长提供良好的生物界面。随着研究的深入，研究人员发现，在体外培养的种子细胞增殖缓慢、黏附力低下。根据Simon等的研究发现，去细胞猪主动脉瓣的受体为儿童时，瓣膜寿命明显缩短，提示去细胞猪主动脉瓣仍然存在一定的免疫原性。因此，如何促进种子细胞与瓣膜支架黏附，进而分化、增殖并对支架进行改建仍是TEHV体外构建的关键所在。应用基因转染的方法加强或改造种子细胞的功能是当今组织工程研究中的热点之一，本实验尝试采用基因转染的方法增强种

8、子细胞的黏附力助于体外构建TEHV。转化生长因子Dl(TGF．B1)是一种高活性、多功能生物信号分子，存在于大多数哺乳动物，具有极高的同源性，人和大鼠相比较仅1个氨基酸不同。编码人TGF—pl的基因位于19q13。其生物学作用主要有促进间质细胞的增殖和抑制部分细胞的增殖；促进细胞外基质合成，抑制降解；诱导细胞分化；免疫抑制作用，对免疫活性细胞的