oshsp82基因的克隆、分析及互作蛋白研究

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1、论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：讧加孚年多月2伊关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描

2、等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：气≯导师签名：协也霍加妒二月>乒日妒争年多月2乒日7．，铆．第一章文献综述1．热激蛋白研究进展1．1热激生理植物在整个生命周期中，都处在一个不断变化着的环境条件之中。适宜的环境条件能保证植物正常发育，但如果环境变化太过剧烈，超过了植物正常生长发育的范畴，就会对植物产生伤害。由于植物本身不能通过移动来逃避生长环境，只有改变自己的应对态势来适应环境。热激是指高温对植物造成的胁迫。植物遭受高温胁迫后，在外观形态上表现出多种症状，如：根系生

3、长受到抑制，叶片茸毛、蜡质、角质层厚度、气孔数量和开度以及栅栏细胞的排列发生变化，叶片萎蔫，呈现水浸状，叶片由绿转为灰白色继而变黄，甚至出现死斑、褐变，树皮灼伤开裂，受伤处的组织形成木栓，花芽数减少，花瓣和花药枯萎失水，花序和子房脱落，配子异常而出现雄性不育等【l】。在分子层面表现有：蛋白质变性，由于维持蛋白质空间构型的氢键和疏水键的键能较低，破坏蛋白质的空间构象，失去二、三级结构，使蛋白质分子展开，失去原有生理活性，膜脂液化，构成生物膜的蛋白质与脂类之间的大键断裂，使脂类脱离膜而形成一些液化小囊泡，从而破坏膜结构，导致膜丧失选择透性与主动吸收等特性

4、【2J。植物在高温胁迫下的生理反应则主要有：有毒物质大量积累，植物组织内氧分压降低，无氧呼吸增强，从而积累乙醛、乙醇等有毒物质，高温可降低SOD等酶的活性，从而使植物体内活性氧及自由基代谢系统失衡，蛋白质合成受阻，降解加速，导致生长受抑制。1．2热激蛋白的发现giotssa在l962年发现果蝇经过热激处理后出现了一种新的唾液腺巨大染色体膨突模式【31，并伴随着新蛋白的合成。由于是在热激条件下产生的蛋白质，故将其命名为热激蛋I刍(heathsockporetn，Hsp)【4】。直至U1978年才证明热激蛋白广泛存在于其他生物中，而且他们在几乎所有的活细

5、胞中都起着重要的作用【5J。关于植物的Hsp，其广泛而深入的研究始于20世纪80年代初。研究者们发现，一些生长在温带的植物如大豆、玉米、甜椒和豌豆等，当组织温度超过32．33℃时就开始合成HSP，而且HSP的合成随温度的升高而增加【6】【7】。一些研究表明，热激蛋白的诱导因子不仅局限于高温，其他环境胁迫也可以提高它的含量。Ristic等【8J发现抗干早和高温的一个玉米品系可以大量合成一种45kD的热激蛋白，而对干早和高温敏感的品系则不能合成。Celler等p】指出，植物在干旱情况下合成的脱水应答蛋白(dehydrins)中的一个亚类属于LEA(1at

6、erembryogenesisabundantprotein)蛋白家族，而与低分子热激蛋白具有很高的同源性。陈忠等‘101的研究表明，PEGn--]以提高Hsp60的表达水平，其最强诱导能力与38"C热激相近。除此之外，砷化物、高盐以及氧化剂和辐射胁迫都可以诱导热蛋白的表达ll¨。随着研究工作的进展，发现Hsp已经不仅仅是在高温下暂时保护细胞的作用【l引。一些热激基因在无刺激的细胞中也有明显的表达【13】，或是在生物体发育的某些阶段表达‘141，或是在细胞周期的特定阶段产生，这种在无热激条件下也表达的热激蛋白质基因家族成员通常被称为Hsc(组成型表达

7、的Hsp)。关于这些基因的功能还有待进一步更加深入研究。1．3热激蛋白的分类植物Hsp的种类很多，通常根据分子量(kD)的大小，将其分为高分子量(>50kD)热激蛋I刍(HighMolecularWeightHsps，简称：HMWHsps)和低分子量(<50kD)热激蛋I刍(LowMolecularWeightHsps，简称：LMWHsps)两大类。而植物Hsps[拘特点是低分子量Hsps丰富。已知在高等植物中，有20多种LMWHsps存在【l51。一般将植物热激蛋白按分子量大小细分为几个家族：Hspl10(>100kD)，Hsp90(80～90kD

8、)，Hsp70(66～78kD)，Hsp60(50-60kD)，sHsps(15-39KD)。1．4热激蛋白