纤毛运送蛋白ift25与ift27基因分析及体内外互作研究

《纤毛运送蛋白ift25与ift27基因分析及体内外互作研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、■分类号：Ｑ８１２学校代码：１００５７密级：不保密研巧生学号：２０１２８０８０１８纤毛运送蛋白ＩＦＴ２５与ＩＦＴ２７基因分析及体内外互作研巧ＧＥＮＥＳＥＱＵＥＮＳＥＡＮＡＬＹ刘ＳＯＦＩＦＴ２５ＡＮＤＩＦＴ２７ＯＦＣＨＬＡＭＹＤＯＭＯＮＡＳＥＥＩＮＨＡＲＤＴＩＩＡＮＤＴＨＥＩＲＩＮＴＥＲＰＬＡＹＳＴＵＤＹ／ｉＶＶＩＶＯＡＮＤＩＮＶＩＴＲＯ专业名称：食品科学指导教师姓名：曹小红教授研究生姓名：李蠢申请学位级别：工学硕±论文提交日期：２０１４年１１月论

2、文课题来源：国家自然科学基金学位授予单位：天津科技大学天津科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究工作所取得的成果。除文中特别加Ｗ标注引用的内容外，本论文不包括任何其他个人或集体己经发表或撰写的成果内容，也不包括为获得天津科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文研巧做出重要贡献的个人和集体，均己在文中Ｗ明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：日期：州；年月＾３ｆ知识产极和专利权保护声明本人郑重声明：

3、所呈交的论文是本人在导师具体指导下并得到相关研究经费支持下完成的，其数据和研巧成果归属于导师和作者本人，知识产权单位属天津科技大学；所涉及的创造性发明的专利权及使用权完全归天津科技大学所有。本人保证毕业后，Ｗ本论文数据和资料发表论文或使用论文王作成果时署名第一单位仍然为天津科技大学。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。■作者签名：＂日期：Ｗｉ啤月（学位论文版权使用授权书、本学位论文作者完全了解学校有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，同意公

4、布论文的全部或部分内容，允许论文被査阅和借阅。本人授权天津科技大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可１＾采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。＂＂保密［□（请在方框内打Ｖ），在年解密后适用本授权书。本学位论文属于＂＂不保密０（请在方框内打Ｖ）。／作者签名：日期：护如／ｒ年（月苗日导师签名日期：啤月吵日Ｉ摘要纤毛内运送（ＩＦＴ）是纤毛内运送颗粒在纤毛基部和其顶端之间进行的双向运动。ＩＦＴ颗粒由复合物Ａ和Ｂ组成，分别至少含有８个和１２个ＩＦＴ蛋白分

5、子。最新研究一表明种细胞天线，，ＩＦＴ颗粒是纤毛生物生，纤毛是负责胞外信息向胞内的传递而成和纤毛信号分子在纤毛和胞内进行传递所必需的。目前已知纤毛物理缺失或其功能一＂缺陷会导致糖尿病和肥胖等多种营养代谢疾病的发生，该类病因此又被统称为纤毛病＂。然而，目前的现状是人们对调控纤毛内运送的分子机制知之甚少。２５２７－Ｂ复合物的小磯酸化蛋白和小Ｇ蛋白组分ＩＦＴ和ＩＦＴ是ＩＦＴ，由诉Ｚ５和诉２７编码。ＩＦＴ２５ＩＦＴ２７本研究通过对莱茵衣藻中及氨基酸序列进行生物信息学分析，我们得知二者在不同物种中高度保守ＩＦ

6、Ｔ２５，ＩＦＴ２７为疏水。纤毛运送蛋白为亲水性蛋白性蛋白，二者皆无跨膜结构和信号肤，属于非分泌型胞内蛋白。－２ＴＭＡＬＣ２Ｈ为在体外相互作用的研究中ｔ＾ＧＥＸ，，，ｐｐ表达载体将目的基因诉別和诉２７分别与上述两种载体相连构成重组质粒，然后导入大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中进行诱导表达ｅｓｔｅｒｎｂｉｏ扣ｎＩＦＴ２５ＩＦＴ２７。通过Ｗｇ检测得到与在体外表达的关系。由实验结果可知，ＩＦＴ２５单独表达时为可溶性蛋白，ＩＦＴ２７单独表达时为水不溶性蛋白，而ＩＦＴ２５与ＩＦＴ２７共表达成的融合蛋白为水溶性蛋白。

7、在体内相互作用研究中，采用基因沉默的方法，分别使ＩＦＴ２５或ＩＦＴ２７在细胞纤毛内的表达量降低，ＷＦＬＡ１０为内参，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｉｏ扣ｎｇ法检测目标蛋白的表达量，探一一究其中个表达量降低时，对另蛋白表达量的影响。ＲＮＡ水平分析发现，Ｗ野生－型ＣＣ１２５的表达量为对照，诉２５基因沉默后，诉２５基因的表达量降低而矿口７表达量却增高；然而诉２７基因沉默后，诉２７表达量降低而诉２５不变。蛋白水平分析发现，ＷＴ２５蛋白水平降低时ＩＦＴ２７蛋白含量也随之下降，而当ＷＴ２７蛋白水平降低时ＩＦＴ２５含量不变。由之

8、前的报道可知ＩＦＴ７７的缺陷会引起纤毛病，而本研究告诉我们ＩＦＴ２５与ＩＦＴ２７无论在体内还是体外都存在相互作用，因此我们推测２５ＩＦＴ２７ＩＦＴ与协同作用于纤毛的装配，并深刻影响其生理功能。关键词：莱茵衣藻；ＩＦＴ２５ＩＦＴ２７互作