鱼类淋巴囊肿病毒lcdv胶体金免疫层析试纸条研制论文

《鱼类淋巴囊肿病毒lcdv胶体金免疫层析试纸条研制论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、鱼类淋巴囊肿病毒(LCDV)胶体金免疫层析试纸条的研制捅要鱼类淋巴囊肿病(Lymphocystisdisease，LCD)是一种典型的皮肤和浅表组织慢性病毒性疾病，其呈世界性分布，可感染已知至少42科140种以上的海水、半咸水和淡水鱼类，是对鱼类危害较为严重的病毒病之一。鱼类淋巴囊肿病病原为淋巴囊肿病毒(Lymphocystisdiseasevirus，LCDV)。目前LCDV的检测方法主要是组织病理技术、电镜技术、细胞培养技术、免疫检测技术和分子检测技术等。这些检测方法在准确性、灵敏性、安全性和花费等方面有各自的优点，但是它们不同程度上受到需要专业人员和复杂仪器的限制

2、。胶体金免疫层析技术具有快速、简便、结果直观等特点，而单克隆抗体技术具有良好的特异性和灵敏度，本论文将两者结合旨在建立克服上述局限性的鱼类LCDV胶体金免疫层析试纸条。将3株分泌小鼠抗LCDV囊膜蛋白单克隆抗体(单抗)的杂交瘤细胞株182、1D7和2D11扩大培养，并腹腔注射BALB／C小鼠制备抗LCDV腹水单抗。利用辛酸．硫酸铵法纯化腹水单抗，纯化后的单抗经SDS．PAGE分析，IgG重链和轻链区带明显，蛋白纯度较高，适合检测和胶体金的标记；Westernblotting分析抗LCDV单抗的抗体类型，3株单抗均属于IgG类；免疫荧光实验和斑点免疫印迹实验表明3株单抗特

3、异性地与LCDV结合；间接ELISA实验测得腹水单抗182、1D7和2Dll的效价分别为：1：25600、1：12800和1：25600；相加ELISA实验进行抗原表位分析，结果显示3株单抗识别不同的抗原表位。通过分析测定单抗的抗体类型、特异性、效价和抗原表位，选择抗体类型是IgG类、特异性好、效价较高、识别不同抗原表位的单抗182和2D11分别用作捕获抗体和标记抗体。采用双抗体夹心原理制备鱼类LCDV胶体金免疫层析试纸条。以微波炉作为加热容器，利用柠檬酸三钠还原法制备了粒径大小约为20nm单分散系的胶体金。肉眼观察制备的胶体金呈红色，紫外可见光谱分析和透射电镜观察胶体

4、金颗粒分布均匀、大小一致。通过探索胶体金与单抗2D11的最佳标记条件，确定胶体金与单抗的标记pH值为8．2，稳定胶体金的单抗标记用量为18p咖l。以最佳标记pH值和最佳标记蛋白量对胶体金进行单抗标记，紫外可见光谱分析和透射电镜观察胶体金吸附上单抗，经免疫渗滤法鉴定制备的金标抗体具有良好免疫活性。将金标抗体喷涂于玻璃纤维膜上制成金标垫，单抗182和羊抗小鼠IgG抗鱼类淋巴囊肿病毒(LCDV)胶体金免疫层析试纸条的研制体分别包被于硝酸纤维素膜(NC膜)上作为检测线和质控线制成NC膜检测层，与样品垫、吸收垫和塑料底板组装成鱼类LCDV胶体金免疫层析试纸条。对其进行了优化实验，

5、筛选出合适的鱼类LCDV胶体金免疫层析试纸条制作材料。确定了金标抗体的最适稀释倍数为l：2，单抗182和羊抗小鼠IgG抗体的最适包被浓度分别为1mg／ml和0．5mg／ml。用鱼类LCDV胶体金免疫层析试纸条检测样品，若待测样品中含有LCDV，NC膜上检测线和质控线显示肉眼可见的红线，若待测样品中无LCDV则只在质控线出现红线，整个反应过程可在10min内完成。鱼类LCDV胶体金免疫层析试纸条对FG细胞上滴度是1．65x29TCID5删的LCDV提取液进行检测，可以检出的LCDV量为．Jj；'／TCID50／ml。鱼类LCDV胶体金免疫层析试纸条与斑点免疫印迹法、ELI

6、SA进行比较，检测灵敏度一致。本论文研制的鱼类LCDV胶体金免疫层析试纸条具有快速、简便、准确、结果直观的特点，为鱼类LCDV的快速检测提供了一种实用的方法。关键词：淋巴囊肿病毒(LCDv)；单克隆抗体；胶体金；免疫层析II鱼类淋巴囊肿病毒(LCDV)胶体金免疫层析试纸条的研制DevelopmentofacolloidalgoldimmunochromatographicteststripfordetectinglymphocystisdiseasevirusinfishAbstractLymphocysfisdiseaseisachronic，benignvirald

7、iseasecharacterizedbytheappearanceofpearl-likenodulesconsistingofenormouslyhypertrophieddermalcellsinskin，gills，finsandeventheintemalorgans．Lyrnphocystisdiseasevirus(LCDV)，thecausativeagentoflymphocystisdisease，hasaworldwidegeographicaldistributionandhasinfectedmorethan14