flavopiridol对eca9706细胞株放射增敏作用体外的研究

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1、独创性声明)煳愀本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：丝年上月二日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··l(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(一)日IJ舌⋯⋯”⋯一⋯”“⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯”“．6(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23三、综

3、述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3l四、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34FlavopiridoI对EOa9706细胞株放射增敏作用的体外研究硕士生姓名：指导教师：指导小组：专业名称：郭桂英石静滨教授肿瘤学摘要全世界每年食管癌新发病例40多万，约有25万发生在我国，占全部食管癌病例数的一半以上。同时，我国也是食管癌世界年龄调整死亡率最高的国家，每年因食管癌死亡

4、者约15万人，几乎占全国恶性肿瘤死亡人数的四分之一，世界食管癌死亡人数的二分之一，已经严重威胁到人群生命健康【11。尽管放射治疗是食管癌的主要治疗手段之一【2】，但是临床效果及生存率仍不尽人意，常规放疗后原发部位肿瘤的残存率达75．96％【引，患者5年生存率仅为8％～16％14J。其主要原因是食管癌周边正常组织的耐受性较差，常规剂量不足以杀灭原发灶肿瘤。常规化疗效果不佳，且副作用大，患者常难以耐受，其他疗法如基因治疗、生物治疗等作用亦未见明显成效【5J。因此，寻找能提高肿瘤细胞放射敏感性的放射增敏剂，成为优化食管癌治疗

5、的新途径。1974年英国Adams等人发现眯嗦哒唑(MIsO)有一定放射增敏作用，但因其神经毒性大，限制了临床推广应用。迄今为止临床尚无一种有效而低毒的放疗增敏剂【6J。Flavopiridol是美国国立癌症研究所(NCI)和HMR(HoechstMarionRoussel)联合开发的一种新型抗癌药17J，目前正处于I期和II期癌症临床试验博J。它是一种强有力的小分子细胞周期素依赖性蛋白激酶(cyclin．dependentldnase，CDK)抑制剂，可以通过直接抑制CDK的活性，阻断细胞周期G】／S及G2／M的调控

6、点，使细胞不能进入S期而生长受抑【9‘1⋯。最近研究显示Flavopiridol能够增强TE8，TE9(食管癌高，低分化鳞癌细胞系)的放射敏感性Il¨，并且对人尤文肉瘤细胞株的生长也具有强烈的抑制作用u孙。然而，中国最常见的食管癌是鳞状细胞癌(ECa9706细胞株)，而Flavopiridol对食管癌鳞状细胞癌ECa9706细胞株是否也具有放射增敏作用，目前尚未见报道，因此，本实验采用体外培养食管癌ECa9706细胞株，经Flavopiridol和／或放射处理，检测细胞存活率、细胞凋亡及相关信号通路蛋白的表达，探讨Fl

7、avopiridol对食管癌放射增敏作用及机制，为临床食管癌的治疗提供新的思路和方法。目的：研究细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂Flavopiridol对人食管鳞状细胞癌细胞ECa9706细胞株的放射增敏作用并探讨其机制。方法：采用MTT法和克隆形成实验，测定Flavopiridol对食管癌细胞株的生长抑制率及放射增敏比。细胞免疫化学法检测survivin，caspase．3，P53在各组中的表达。TUNEL法检测上述各实验组细胞凋亡情况。结果：1．MTT法和克隆形成实验结果显示，Flavopiridol对ECa

8、9706细胞株存活率有明显的抑制作用，呈现时间剂量依赖性关系，半数抑制浓度IC50为256nmol／L。2．Flavopiridol联合不同照射剂量作用于ECa9706细胞株，存活分数(SF)与放射组治疗相比差别均有统计学意义(P