hs及其体外抗乳腺癌作用

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1、分类号R963密级学校代码10367UDC615.1编号学号20068631106学位论文HS及其体外抗乳腺癌作用TheHeparanSulfateChainsAndIt’sAntineoplasticEffectsonBreastCancerCellsinvitro钱江华指导教师姓名蒋志文教授蚌埠医学院药理教研室申请学位级别硕士学科专业药理学论文提交日期2009年4月论文答辩时间2009年5月学位授予单位蚌埠医学院学位授予日期2009年6月答辩委员会主席：论文评阅人：2009年4月硕士学位论文论文题目:H

2、S及其体外抗乳腺癌作用研究生姓名:钱江华指导教师:蒋志文教授学科专业:药理学研究方向:生化药理学论文工作时间:2007年8月至2009年3月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下独立进行实验研究工作所取得的成果，本论文中不包含其他人已经发表或已经获取得的研究成果。在本论文撰写中所引用其他研究者的研究内容和成果时已在论文中给予特别标注和明确说明。对本论文的实验研究过程中给予帮助的其他人士，以及论文撰写中所提供的建议等的贡献也已作了致谢说明。本人完全理解本声明的法律责任，以及所涉及的

3、结果将由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日关于学位论文著作权共享声明根据《中华人民共和国著作权法》和《高等院校知识产权管理条例》，本学位论文，题目：HS及其体外抗乳腺癌作用，是研究生在导师指导下完成的职务作品，得到蚌埠医学院相关部门科室的物质技术和经费支持。因此，本学位论文的著作权由研究生、导师和蚌埠医学院三方共同享有，均享有署名权和使用权等权益；本学位论文成果归属蚌埠医学院。根据国家学位授予条例，学校对本学位论文有使用权，包括保存本学位论文；因教学和科研的目的，保留在图书馆被查阅或借阅；学校可根据国

4、家规定将本学位论文送交国家有部门保留和使用。学校在公布本学位论文的全部或部分内容时，应保障研究生和导师的署名权等权益。研究生和导师在公开发表本学位论文的全部或部分内容时必须保障学校的署名权等权益，即在发表论文时蚌埠医学院及相关部门科室应署名为作者单位。声明人完全理解本声明的法律责任。作者签名：导师签名：日期：年月日目录一、中文摘要………………………………………………………1二、英文摘要………………………………………………………3三、论文正文1、前言……………………………………………………………52、材料与方

5、法………………………………………….….………73、结果………………………………………………………...…124、讨论……………………………………………………….…..235、结论……………………………………………………….…..286、参考文献……………………………………………………...297、致谢………………………………………………………...…32四、附录A英文词汇对照表…………………………………………….…33五、附录B研究生学习期间发表的文章…………………………………34六、附录C1、综述正文…

6、………………………………………………...…352、参考文献…………………………………………………...…39HS及其体外抗乳腺癌作用摘要目的：1、HPLC色谱法检测MCF-7细胞来源的硫酸乙酰肝素(heparansulfate,HS)；2、研究MCF-7细胞来源的HS对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡的调控作用，及对GRP78蛋白和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响，探讨HS体外抗乳腺癌作用的机制。方法：1、HS链的提取、纯化及HPLC分析培养人乳腺上皮癌细胞MDA-MB-231及MCF-

7、7，收集汇合期培养液，DEAE-Sepharose-CL-6B离子交换色谱分析、透析、蛋白含量测定；硫酸软骨素酶（ChondroitinaseABC）化学降解、冷冻干燥，链霉蛋白酶（Pronase）降解硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（heparansulfateproteoglycan,HSPG）的核心蛋白；或肝素酶Ⅰ（HeparinaseⅠ）化学降解、冷冻干燥，链霉蛋白酶降解硫酸软骨素蛋白聚糖（heparansulfateproteoglycan,CSPG）的核心蛋白，冷冻干燥备用。收集上述各步提取物，分别于HPL

8、C分析。2、HS链的体外抗乳腺癌实验用不同浓度的MCF-7细胞来源的HS处理MDA-MB-231细胞，倒置显微镜下观察用药前后受试细胞形态的变化；噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长抑制率；流式细胞仪(flowcytometer，FCM)检测细胞凋亡率；蛋白质印迹(westernblotting)法检测GRP78和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果：1、HPLC分析证实经酶解后最终所得细胞合成物为HS链。2、H