中国hiv-1流行株对广谱中和抗体vrc01敏感性分子机制地研究

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1、博士学位论文中国HlV-1流行株对广谱中和抗体VRC01敏感性的分子机制研究所院：姓名：指导教师：导师小组：学科专业：研究方向：完成日期：病原生物学研究所郭东星张林琦病原生物学HIV-1广谱中和抗体2012年4月学校代码：10023学号lB2010035008独创性声明⋯HillrllIrJlrlnnIIIY2340433本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文

2、中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：毒春鼋签字日期：们哆年6月7日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解童匕塞协塑医堂睦有关保存、使用学位论文的管理办法。有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权jE塞坯塑医堂瞳可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：郜者、宅签字日期：加J弓年G月7日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：导师签名：狰钟增』签字日期：p／；年6月7日电话：邮编：目录摘要⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。，⋯1ABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5f

4、U吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯研究路线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。311毒株筛选结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．312HIV-1突变株对VRC01的中和敏感性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯393HIV-1突变株对VRC01的中和敏感性与结合能力的关系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．484HIV-1突变株对其它CD4结合位点相关的蛋白及抗体的中和敏感性⋯⋯⋯．565对VRC01耐受的毒株在感染者体内的变化规律⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯70讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯．77结ij仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．81参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．82摘要人类免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirus，HIV)膜区的糖蛋白具有高度的变异性，可以导致病毒逃逸人体内发生的抗原抗体反应，是人类研究有效的艾滋病疫苗的主要障碍。在过去四年中，通过综合应用先进的技术策略，研究者们分离发现了多个完全人源的具有高效中和能力的单克隆广谱中和抗体。根据广谱中和抗体设计相应的疫苗成为HIV-1疫苗研究的热点方向。VRC01，是研究

7、者采用高通量特异性扩增单个B细胞抗体的技术于2010年发现的具有广谱中和活性的单克隆抗体。研究表明，VRC01作用于HIV-1膜蛋白表面的CD4结合位点，主要作用于gpl20蛋白的loopD区域、CD4结合区和V5区域。VRC01能够高效中和90％以上的国内外HIV-1流行株。但在研究中仍发现了少数的分离毒株对VRC01具有不同程度的耐受，深入研究这些流行毒株对广谱中和抗体VRC01的耐受机制，并阐明耐受株在体内免疫选择压力作用下对VRC01的中和敏感性的变化规律，能够帮助人们更好地了解病毒与广谱中和抗体的相互作用机制，同时能够为抗体相关疫苗的研制和应用提供重要的信息。为了

8、研究中国Hrv二1流行株与广谱中和抗体VRC01的相互作用特点并揭示流行株中耐受毒株的耐受机制，本研究首先通过序列比对分析和假病毒的中和实验筛选到分离自同一份硼v-1CRF08B’C亚型感染者样本的两株病毒CNE47和CNE48，这两株病毒的膜蛋白序列高度相似，94％以上的氨基酸序列完全相同，在与VRC01相互作用的主要区域中，loopD区域仅有一个氨基酸的差异，CD4结合区则完全相同，V5区域有4个氨基酸不同。但是这两株病毒对VRC01的中和敏感性相差24倍左右，其中CNE47对VRC01相对不敏感(IC50=9