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1、低温处理后不同竹种cDNA分子水平上的变化和聚类分析摘要：以慈竹和硬头黄竹等12个竹种为材料，采用RAPD-PCR方法，研究低温胁迫后不同竹种cDNA分子水平上的变化。结果是低温处理后，不同竹种的cDNA经不同引物扩增后，其RAPD-PCR谱带的变化出现4种类型，即有的竹种出现原有RAPD-PCR谱带的缺失、新谱带的出现以及原有谱带强度的增强和减弱，有的竹种RAPD-PCR谱带未发生改变，这表明低温处理后不同竹种在分子水平上确实发生了变化，这种变化与低温胁迫有关，且因竹种而异。关键词：竹；低温胁迫；cDNA水平变化；聚类分析中图分类号：S795文献标识码：A文章编号：0439-811407
2、-1484-04VariationandClusteringAnalysisaboutcDNAofBambooTreatedbyColdHUShang—1ian1,CA0Ying1,DUANNing1,LIYi1,CHENQi-bing2,LUXue-qin1,JIANGYao1,2Abstract：ThechangesofRAPD—PCRpatternsandc1usteringanalysisofcDNAfromtwelvebamboospecies,inc1udingNeosinocalamusaffinisandBambusarigidaect・，underthecondition
3、of1owtemperaturewerestudied・Theresu1tsshowedthatthechangesofRAPD—PCRpatternsofthecDNAdifferedfromspeciestospecies・Comparedwiththecontro1,thevariationpatternsofde1etionorappearanceofnewofRAPD—PCRbands,strengtheningorweakeningofRAPD—PCRbandswerefound・However,nochangeofRAPD—PCRbandswasfoundinsomespec
4、ies・ThepatternchangesofRAPD—PCRbandswererelatedtothe1owtemperaturestressanddifferentbamboospecies・Keywords：bamboo；1owtemperaturestress；changesofcDNA；c1usteringanalysis在低温胁迫下植物体内的可溶性糖［1］、可溶性蛋白质和游离脯氨酸、保护酶活性［2］等常发生变化。以往对竹子抗寒性的研究，主要集中在自然条件下与竹子抗寒性有关的生理生化指标的分析上［3—6］,而分子水平的变化鲜见报道，本文以慈竹、硬头黄竹等12种竹子为材料，采用RA
5、PD-PCR技术，研究低温胁迫后不同竹种cDNA水平上的变化，为竹子抗寒机制的研究提供理论依据。1材料与方法1.1材料供试材料采自四川青神竹艺城，分别为慈竹、硬头黄竹、小琴丝竹、青皮竹、粉单竹、钓鱼竹、罗汉竹、凤尾竹、斑竹、实心竹、苦竹、巨竹，共计12种竹子。1.2处理方法选取长势一致的枝条，将其剪成30cni长的枝段,洗净擦干，石蜡封口，置于低温冰箱中一15°C处理12h,每个样品设置3次重复。处理后将叶片于液氮中速冻30min后保存于一80°C冰箱。将未处理的枝条叶片于液氮中速冻30min后保存作为对照。1・3不同竹种叶片总RNA的提取和cDNA的合成1.3.1叶片总RNA的提取将叶片
6、置于液氮中迅速研磨，将研碎的粉末迅速转入1.5mLEP管中，加入Trizo1试剂，室温下放置10min；4°C11800r/min离心5min；取上清，加入200
7、iL氯仿，剧烈混匀，室温下放置10min；4°C11400r/min离心15min；取上清并加入500L异丙醇，混匀后于4°C11400r/min离心10min；去上清，75%乙醇洗RNA沉淀；干燥RNA沉淀；加入DEPC处理水溶解RNAo1.3.2cDNA的合成cDNA合成反应由Qiangen公司的Ominiscriptreversetranscriptaseforfirst—strandcDNAsynthe5iskit反转录
8、试剂盒提供的试剂进行，扩增反应在Bio-RadPCR自动扩增仪PTC-200上面进行，20yL扩增体系如表1所示。PCR仪中37°C恒温60min,取出产物，一20°C条件下保存。1.4RAPD引物根据Wu等［7］设计的引物，由北京奥科生物技术有限责任公司合成。1・5RAPD扩增采用18个RAPD引物对12个不同竹种的cDNA进行PCR扩增。PCR扩增反应体系为：10xPCRBuffer2.00yL,25mmo1/LMg
