裂殖壶菌schizochytrium+wzu4771流加发酵生产dha

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1、温州医学院硕士毕业论文答辩委员会主席：林文翰答辩委员会成员：叶发青仇佩虹董建勇周健民论文答辩日期：2010．5．27一＼科燃目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3ABSTRACT．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8第1章5L发酵罐培养裂殖壶菌的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．i01．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．i0I．1．1实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．10I．i．2实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1I1．2结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯．．16I．2．1摇瓶种子种龄的确定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16i．2．2发酵培养基起始葡萄糖浓度的确定⋯⋯⋯⋯⋯⋯171．2．3自然pH发酵过程⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯211．2．4pH对裂殖壶菌生长及积累脂肪和DHA的影响⋯⋯⋯22I．2．5溶氧对裂殖壶菌生长及及积累脂肪和DHA的影响⋯⋯321．2．6酵母粉对裂殖壶茵生长与积累脂肪和DHA的影响⋯⋯35第2章50L发酵罐培养裂殖壶茵的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．392．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．392．1．1实验材料⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．392．1．2实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．392．2结果与

3、分析⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．40温州医学院硕士毕业论文2．2．1确定二级种子的种龄⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．．4O2．2．2发酵进程⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯422．3小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．43参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．44附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯．．46致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．47第3章文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．483．1DHA的简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯483．1．1多不饱和脂肪酸的结构⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．483．1．2DHA的结构和性质⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．483．1．3DHA的

4、生理功能⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．493．1．4DHA的来源和用途⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．503．2裂殖壶菌的研究概况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯523．2．1裂殖壶菌中DHA的合成途径⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．523．2．2裂殖壶菌的安全性评价及应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．543．2．3发展前景⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．54参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．552温州医学院硕士毕业论文中文摘要目的：通过优化裂殖壶菌(SehizoehytriumWZU4771)生长的条件使菌体在5L发酵罐中达到最佳的生长水平：同时通过放大实验，对裂殖壶菌在50L发酵罐中的生长情况进行初步的研究。方法

5、：1．在无菌操作台中将低温保存的菌种(冷冻管)接入装有50m1种子培养基的250ml锥形瓶中，并在摇床培养三天(25℃，转速200r／min)进行活化。将活化的菌体按5％的接种量转接到装有lOOmL种子培养基的500mL锥形瓶中，并在相同条件下进行摇床培养，制备摇瓶种子液。2．将装有3L的发酵基础培养基5L标准发酵罐灭菌冷却后，按照1096(v／v)的接种量将培养48小时的种子接种到发酵罐中，在初始温度25℃，一定搅拌速度和通气量的条件下，采用间歇流加葡萄糖的方式进行培养，当葡萄糖浓度降至lOg／L以下时要补加葡萄糖，每次补糖约309／L。定时取样测定葡萄糖的浓度和生物量

6、，在每次流加后要留样测油脂含量和DHA含量。通过调节发酵培养基的初始pH值、在线控制发酵过程的pH值、在线控制DO值，探讨pH和D0值对裂殖壶菌生长、积累油脂和DHA的影响。3．将装有30L的发酵基础培养基的50L发酵罐灭菌冷却后，按照按10％(v／v)的接种量将在5L发酵罐内培养24小时左右的二级种子接种到发酵罐中，在温度25℃，一定搅拌速度和通气量的条件下，采用间歇流加葡萄糖的方式进行培养，当葡萄糖浓度降至lOg／L以下时要补加葡萄糖，每次补糖约309／L。定时取样测定葡萄糖的浓度和生物量，在每次流加后要留样测油脂含量和DHA含量。4．采用酸热法提取裂殖壶菌茵体的油脂

7、，经甲酯化后用气相色谱法检测菌体DHA含量(内标法，以花生酸为内标物)。结论：1．确定摇瓶种子培养时间为48小时，发酵培养基的起始葡萄糖浓度为3％。2．在装有3L培养基的5L发酵罐中按照10％(v／v)的接种量、培养温度25℃、采用间歇流加葡萄糖的方式培养裂殖壶菌。(1)裂殖壶菌在发酵罐中的培养时间定在60-70小时最为合适。(2)在起始培养基pH6-8范围内，裂殖壶菌的生物量、茵体油脂和DHA含量没有明显变化，发酵基础培养基的自然pH接近6．0，因此采用自然pH培养基发酵。(3)较高溶氧有利于裂殖壶菌的生长，但低溶氧有温州医