低let射线对正常肝细胞与肝癌细胞辐射敏感性对比研究

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1、584以科学发展观健进科技创新(上)223徐管鑫．何为．颅内血肿水肿成像研究一仿真与模拟实验．中国医学物理学杂志，2001，18(2)：74～76作者简介张占龙，重庆大学电气工程学院教师，重庆大学生物工程学院在站博士后。联系电话02365t06977—80i8，13206003763；传真：02365105242；E—mail：ccelcd@cvelcdCOrn。低LET射线对正常肝细胞与肝癌细胞辐射敏感-眭对比研究①杨建设h2李文建1赵靖3夏景光1’2周利斌1’2王菊芳1金晓东L2王转子k2高清祥41．甘肃，兰州，

2、中国科学院近代物理研究所，730000；2．北京，中国科学院研究生院，100039；3．北京，中国科学院生物物理研究所，100101；4．甘肃，兰州，兰州大学生命科学学院，730000摘要应用早熟染色体凝集技术对人肝癌细胞系和人正常肝细胞系的低LET射线辐射敏感性研究发现，两者的存活曲线符合线性=次平方模型，人正常肝细胞系的克隆存活率高于肝癌细胞系。G：期细胞染色单体厦等点染色单体断裂数肝癌细胞系均高于人正常肝细胞系。表明低LET射线辐照时人正常肝细胞的辐射敏感性低于肝癌细胞，提示在进行肝脏恶性肿瘤低LET射线放射治

3、疗时射线对正常组织的损伤较小。关键词射线肝细胞肝癌细胞辐射敏感性一、引言恶性肿瘤是严重危害人类生命健康的一类疾病，据世界卫生组织统计，癌症的发病率逐年上升．目前其死亡率仅次于心血管疾病。由于对其发病机理认识不明确，因此治疗效果差。放射治疗是较为有效的治疗手段之一，但是放射治疗时射线对正常组织的杀伤是严重影响肿瘤治疗效果的因素之一，因此，正常组织和癌组织辐射敏感性的预测研究对于肿瘤诊疗计划的实施非常重要。在此我们将应用早熟染色体凝集技术对人正常肝细胞系(L02)和人肝癌细胞系(SMMC一7721)的7射线辐射敏感性进行

4、比较研究，以期为肝恶性肿瘤的诊断和治疗以及防护提供理论依据。二、材料和方法1．细胞培养、照射和存活辜测定SMMC一7721和L02(均购自ccTcC)用含有10％胎牛血清的RPMI一1640培养液在3TC5％c02的恒温培养箱内培养，L02的培养基内另加人胰岛索0．25U／mL。①国家重点自然科学基金(10335050)和国家重尢基础研究前期研究专项(2003CCB0020)资助项目以科学发展观促进科技刨糯(三)指数生长期的两种细胞在兰州医学院第一附属医院60Co源产生的7射线(剂量率0．20ylmin)进行照射。照

5、射吸收剂量分别为0、0．5、l、2、4、6和80y。照射后各剂量点的细胞经酶消化、稀释适当倍数之后接种至960的培养皿内．每个剂量点接种200、400、600个细胞3个浓度。每一浓度三皿重复，加含10％胎牛血清的RMPI一1640培养液至5mL，在37C5％c02的恒温培养箱内培养14d以形成克隆，5％Giemsa染色，计数，求出各个剂量点的细胞存活率，绘制存活曲线。2．PCC方法、染色体制备和观察计数Calyculin—A(购自美国BIOMOL公司)是一种良好的PCC诱导剂，将其溶于100％的乙醇里制成lmM的储存

6、液。照射前将其加人需照射细胞的培养液内，终浓度为50nM。细胞经照射后在37"C5％COz的恒温培养箱内继续培养30min。收集细胞，75mMKCI低渗处理20rain，卡诺氏液固定，最后以少量固定液悬浮细胞，滴片，在热蒸汽上烘干，5％Giemsa染色。按照Savage报道的标准，每个剂量点观察不少于40个的G2期细胞，求出这些细胞内染色单体和等点染色单体的平均断裂数，即为该剂量点的染色单体和等点染色单体断裂数，每个等点染色单体断裂被计为两个断裂。三、结果1．Gz期染色体示例图1是G2期L02细胞经7射线照射后的染色

7、体断裂类型。图中显示细胞在经照射后，细胞内的染色体发生了不同程度的损伤，染色体断裂的形式有染色单体断裂和等点染色单体断裂。2．细胞存活率测定图2为两种细胞经7射线照射后的存活曲线。SMMC一7721细胞存活曲线经线性平方拟合后方程为S=e油们D。o06D‘’，R2=1，a和p值分别为0．03和006，L02细胞的存活曲线方程是s=el““”“””’，R2=0．99，n和口值分别为0．04和0．05。对比两种细胞的存活曲线可知，在y射线照射后SMMC～7721细胞的存活率低于L02细胞。其敏感性以Do表示分别为0．60

8、Gy和0．67Gy。图1G2期1．02细胞经-／射线照射后用PCC技术获得的染色体断裂长箭头指示染色单体断裂，短箭头指示等点染色单体断裂图2L02细胞和SMMC一7721细胞经-1射线照射后的细胞存活曲线IouEo哥^IE；t586以科学发展观促进科技创新(上)3．两种细胞Q期染色单体断裂与等点染色单体断裂图3显示了两种细胞在7射线照射后染色体