总糖和还原糖的测定──费林试剂比色法

《总糖和还原糖的测定──费林试剂比色法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、实验一总糖和还原糖的测定（一）──费林试剂比色法目的要求掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用直接滴定法测定还原糖的方法。 实验原理 将一定量的碱性酒石酸铜甲液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀： 2NaOH+CuSO4=Cu(OH)2+Na2SO4 所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应，生成可溶性的酒石酸钾钠铜： COOKCOHHCOHCOONaHCOOKCOHCOCOONaHCu(OH)2+=Cu+2H2

2、H2O 在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，还原糖则被氧化和降解，其反应如下： △反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于观察滴定终点。 Cu2O+K4Fe(CN)6+H2OK2Cu2Fe(CN)6+2KOH（氧化亚铜）（淡黄色） 滴定时以亚甲基蓝为氧化－还原指示剂。因为亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜离子全部被还

3、原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。根据样液量可计算出还原糖含量。  试剂和器材 一、试剂碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g亚甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释到1000ml。碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠及75gNaOH，溶于蒸馏水中，再加入4g亚铁氰化钾［K4Fe（CN）6］，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000ml，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。0.1％葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g经98～100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入1000ml容量瓶中

4、，加入5ml浓HCl（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000ml。6mol/LHCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。6NNaOH：称取120gNaOH溶于500ml蒸馏水中。0.1%酚酞指示剂。二、材料山芋粉 三、器材电热恒温水浴锅，调温电炉，250ml锥形瓶，滴定管。 操作方法 一、样品中还原糖的提取准确称取2g山芋粉，放在100ml烧杯中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加入50ml蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出

5、混。过滤，将滤液全部收集在100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。二、样品中总糖的水解及提取准确称取1g山芋粉，放在锥形瓶中，加入6mol/LHCl10ml，蒸馏水15ml，在沸水浴中加热0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕。冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6NNaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100ml，过滤取滤液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。三、碱性酒石酸铜溶液的标定准确吸取碱性酒石酸铜

6、甲液和乙液各5.00ml，置于250ml锥形瓶中，加蒸馏水10ml，加玻璃珠3粒。从滴定管滴加约9ml葡萄糖标准溶液，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s，趁热以每2s1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。平行操作3次，取其平均值，按下式计算：式中：F──10ml碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的量，mg；C──葡萄糖标准溶液的浓度，mg/ml；V──标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积，ml。四、样品糖的定量测定(1)样品溶液预测定：吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液各5.00ml，置于250ml锥形瓶中

7、，加蒸馏水10ml，加玻璃珠3粒，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s，趁热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品溶液，滴定时要保持溶液呈沸腾状态。待溶液由蓝色变浅时，以每2s1滴的速度滴定，直至溶液的蓝色刚好褪去为终点。记录样品溶液消耗的体积。(2)样品溶液测定：吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液各5.00ml，置于锥形瓶中，加蒸馏水10ml，加玻璃珠3粒，从滴定管中加入比与测试样品溶液消耗的总体积少1ml的样品溶液，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s，趁热以每2s1滴的速度继续滴加样液，直至蓝色刚好褪去为终点。记录消耗样品溶液的总体积。平行操作3次

8、，取其平均值。五、结果处理其中：m──样品重量，g；式中：F──10ml碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的量，m