galectin3sirna和piresil24trail构建及其对乳腺癌细胞增殖和凋亡影响

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1、博士学位论文Galectin．3siRNA和pIRES—IL一24一TRAIL的构建及其对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响博士研究生：魏杨辉指导教师：吴爱国研究背景和目的摘要乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。在我国占全身各种恶性肿瘤的7％～10％。近年来在我国，特别是在一些大城市及沿海经济发展较快的地区，发病率呈迅速上升趋势，是危害妇女健康的主要疾病。回首过去的二十年，乳腺癌的诊治取得了长足的进展，尤其是在外科治疗方面的发展取得了较好的效果。与此同时，对乳腺癌生物学行为的认识也不断深入，利用现代分子生物学技术对肿瘤的发生、发展进行了进一步的阐述，针对乳腺癌的预后，尤其是已发生

2、侵袭转移的晚期患者预后较差，侵袭转移机制亦已成为当今的研究热点。众所周知，恶性肿瘤的侵袭转移是个多因素、多步骤的进展过程，但其具体机制仍不清楚。全世界每年约有120万妇女患上乳腺癌，占所有女性肿瘤的18％，其中超过17万的患者是三阴性乳腺癌(triple．negativebreastcancer，TNBC)，占乳腺癌患者的10％．23．8％。TNBC具有侵袭性强、复发早、进展快、生存时间短等特殊临床生物学行为，且对大多数内分泌治疗及乳腺癌的靶向治疗(针对HER．2过表达和雌孕激素受体表达阳性)不敏感，预后较其他类型乳腺癌差。传统的肿瘤治疗模式(手术、放疗、化疗)依然是目

3、前肿瘤治疗的主要手段。然而，随着摘要对肿瘤细胞生长、增殖、凋亡的分子机制研究的深人，伴随着分子生物学革命性的进展，肿瘤的治疗已进人生物治疗时代，使人类靶向性治疗肿瘤成为可能。靶向治疗用肿瘤细胞可以表达，而正常细胞很少或不表达的特定基因或基因的表达产物，形成相对或绝对靶向，最大限度地杀伤肿瘤细胞，而对正常细胞损伤很小的治疗方法。乳腺癌分子靶向治疗是指针对乳腺癌发生、发展有关的癌基因及其相关表达产物进行治疗。用于治疗乳腺癌的分子靶向药物通过阻断肿瘤细胞或相关细胞的信号转导，来控制细胞基因表达的改变，而产生抑制或杀死肿瘤细胞。由于三阴乳腺癌组织学分级较差，不表达ER，PR和H

4、ER．2，且多伴有p53突变、EGFR的表达，目前较常用的分子靶向药物不针对这个亚型，尽管该亚型对新辅助化疗有较高的总反应率和病理缓解率，但总体预后仍为最差。目前尚无TNBC的治疗指南，其治疗一般按常规治疗标准进行。近年来，许多研究者启动了多个国际、多中心临床研究，认为三阴乳腺癌主要选择紫杉类、铂类、葸环类及分子靶向治疗药物。目前寻找TNBC的新治疗靶点是当今世界研究的难点和热点。近年有多项研究表明抑制Galectin．3表达可以影响肿瘤细胞的增殖凋亡，鲜有针对乳腺癌尤其是三阴性乳腺癌的研究。Galectin．3是一种半乳糖苷结合蛋白，属于凝集素家族，它在细胞与细胞间及

5、细胞基质相互作用、细胞生长、细胞周期调控、细胞凋亡、细胞损伤和修复过程，肿瘤转化、转移等过程中扮演了一个重要角色。近年来，几项研究证明了Galectin．3在人类肿瘤中过度表达，包括大细胞淋巴瘤、结直肠癌、乳腺癌、肝癌、脑部肿瘤、黑色素瘤、甲状腺癌。Survivin是一个调亡抑制基因，具有调节细胞增殖和调亡的能力，位于人类染色体17q25，有4个外显子和3个内含子，编码全长1417kb。研究发现Survivin表达在所有常见的人类肿瘤内，从35％的胃癌患者到几乎100％的恶性黑色素瘤患者中均可检测到。在大多数病例中，Survivin的表达预示着较差的预后。，Surviv

6、in主要表达于胚胎、发育的胎儿组织和大多数肿瘤组织内，而不表达于成熟的正常组织。Ki．67表达在细胞周期的所有阶段除了Go，它可以用来评估生物行为和增殖活性II博士学位论文的细胞。这种过度表达的Ki．67已经被观察到在许多恶性肿瘤。自从1980年代早期被发现以来，Ki．67一直是肿瘤增殖标志物的研究热点，尤其在淋巴瘤、乳腺癌、内分泌和脑癌。它常作为一个补充的分级系统，包括提示增殖信号的有丝分裂计数。Ki．67是Oncotype评分中的五个扩散基因之一，此外还有16个癌症相关基因，共同检测肿瘤复发。本课题首先从半乳糖凝集素．3(Galectin．3)、生存蛋白(Survi

7、vin)、Ki．67的角度研究乳腺癌侵袭转移的机制，以指导临床上的诊断、分类、预后和治疗。本实验接着从RNA干扰的角度探讨经过干扰后Galectin．3与三阴性乳腺癌增殖和凋亡的关系，了解Galectin．3在三阴性乳腺癌中的生物学作用，为其能否作为三阴性乳腺癌的基因诊断和治疗的靶点提供依据。此外，乳腺癌5年生存率约50"--60％，近50％患者治疗后复发转移，而晚期乳腺癌患者平均生存时间仅18"--30个月。治疗乳腺癌虽然有多种方案可选择，然而预后均不理想，副作用大，且乳腺癌易乳腺外转移，因而成为治疗上最困难的肿瘤之一。传统的治疗方法仅