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《视黄酸对胃癌细胞的诱导分化及其相关酶活性的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、#252#肿瘤防治研究1999年第26卷第4期视黄酸对胃癌细胞的诱导分化及其相关酶活性的影响陈玉强陈正明吴乔苏文金-6摘要:目的研究视黄酸对胃癌细胞的诱导分化及其相关酶活性的影响。方法10mol/L的全反式视黄酸(ATRA)处理胃癌细胞株BGC-823和MKN-45,用流式细胞术检测细胞周期的分布,3以酶标仪测定相关分化标志酶的活性,用H-TdR掺入法测定DNA合成速度和MTT法检测细胞的生长。结果ATRA使BGC-823细胞出现G0/G1期停滞,分化标志酶LDH、ALP和B-G的活性下降,抑制率分别为2214%,
2、32194%和41135%,使DNA合成速率下降41143%,生长抑制率为61103%;但不能改变MKN-45细胞的上述指标。结论ATRA能诱导BGC-823细胞分化并抑制其恶性生长,对MKN-45细胞则没有这种作用。关键词:视黄酸;胃癌细胞;诱导分化;细胞周期;酶活性视黄酸是维生素A的衍生物,对于细胞生长和113LDH、ALP和B-G活性的测定分别参照文献[1]分化具有重要的作用,已成功地用于诱导早幼粒[5][6][7]方法进行。33白血病细胞分化,临床治疗早幼粒细胞白血病的完114H脱氧腺苷(H-TdR)掺入实
3、验消化、收集[2]8全缓解率达88%~91%。有报道视黄酸通过诱细胞,用培养液重悬并计数,调整细胞浓度为10/L,导细胞分化等途径抑制肿瘤细胞生长,在此过程中4吸100Ll至96孔板(每孔10个细胞)。37bC孵育24多伴有细胞周期的G1期停滞,并使乳酸脱氢酶3小时后加10LlH-TdR/PBS溶液(100uCi/ml),终浓(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)、B-葡萄糖醛酸转移酶(B-度为10uCi/ml。继续孵育6小时。每孔加012%G)和神经氨酸苷酶(NANase)等分化标志酶的活性EDTA消化液100Ll,细
4、胞全部脱壁后,收集到玻璃[3,4]发生变化。本文研究全反式视黄酸(ATRA)对胃纤维滤膜上,于Beckman闪烁计数仪测定cpm值。癌细胞株BGC-823和MKN-45的诱导分化作用及其115细胞生长测定(MTT法)参照文献[8]方法相关酶活性的影响。进行。1材料与方法2结果111细胞培养和ATRA处理胃癌细胞株BGC-823211ATRA对胃癌细胞细胞周期分布的影响和MKN-45(购自上海细胞所细胞库)用含10%小牛如表1所示,经ATRA处理后BGC-823的细血清、100U/ml青霉素和100Lg/ml链霉素的
5、RPMI-胞周期分布出现显著变化,G0/G1期细胞明显增1640(GIBCO产品)培养液,置于37bC,5%CO2的孵育多,S期细胞则相应减少,G2/M期细胞也略有减箱中培养。细胞接种24小时后,加入ATRA(Sigma少。而MKN-45的细胞周期分布与对照组相比无明-6产品)连续处理,终浓度为10mol/L。隔天换液,4显改变。天传代。表1ATRA对胃癌细胞细胞周期分布的影响112细胞周期分布的测定消化、收集细胞,以细胞株组别G0/G1SG2/M1000rpm离心5分钟,弃上清,用预冷的PBS洗涤三BGC-823
6、对照组441645121012次,将细胞迅速固定在预冷的75%乙醇中,于4bC保处理78121510618**组存。测定时离心去乙醇,用PBS洗两次,加70LlMKN-45对照组461638151419RNA酶(1g/L)于37bC水浴30分钟以消化细胞质,立处理组481533151810即冰浴,避光加入015ml的50mg/L的碘化丙啶**P<0101,与对照组比较(下同)(Sigma产品)染色30分钟。用流式细胞仪分析细胞212ATRA对胃癌细胞LDH、ALP和B-G活性的影响周期分布。如表2所示,BGC-82
7、3细胞经ATRA处理后基金项目:福建省自然科学基金资助项目(C96002)LDH、ALP和B-G活性均明显降低,抑制率分别为作者单位:361003厦门,中国人民解放军第174医院(陈玉2214%、32194%和41135%;MKN-45的LDH、ALP和强);厦门大学肿瘤细胞工程国家专业实验室(陈正明、吴乔、苏文金)B-G活性则无明显变化,抑制率仅为211%、5134%肿瘤防治研究1999年第26卷第4期#253#和0188%。另外,对照组MKN-45的ALP活性与对照组BGC-823比较,相差近10倍,统计学上有
8、显著差异。表2ATRA对胃癌细胞LDH、ALP和B-G活性的影响#细胞株组别LDHALPB-GBGC-823对照组01837?0106411022?0106301212?01018处理组01639?01027******01686?0103501129?01034MKN-45对照组01619?0104501105?0100801226?01004处理组016
