动物源沙门氏菌耐药基因及毒力岛基因mgtc和sopb检测

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1、摘要沙门氏菌（Salmonella）是一种重要的致病菌，它能引起人以及动物疾病。通过流行病学调查报告表明，沙门氏菌含有的毒力岛基因与沙门氏菌病有非常紧密的联系。毒力岛相关基因的发现，对疾病的控制和预防，理解细菌性疾病的发生和发展具有很深远的意义。本课题是利用PCR（Polymerase ChainReation）技术，按照致病性动物源性沙门氏菌的耐药基因和毒力岛特异性基因来设计引物，通过优化扩增条件和引物组合的配对，得到了致病性畜禽沙门氏菌耐药基因PCR检测方法以及毒力岛基因双重PCR方法。运用建立的方法对

2、猪源沙门氏菌进行了流行病学调查，旨在为人畜共患沙门氏菌病的控制和预防提供了充分的理论基础。具体的研究方法及研究的结果如下：1、动物源性沙门氏菌四种耐药基因的PCR 检测该研究对实验室已经分离保存到的24 株畜禽沙门氏菌株（鸡源10 株、猪源14 株）进行了药敏试验，并设计6对引物，对氨基糖苷类、四环素类、β内酰胺类和氯霉素类四大类药物的耐药基因进行了扩增，建立了耐药基因的PCR检测方法，最后对畜禽沙门氏菌的耐药基因和耐药性进行了对比，药敏试验结果表明：20 株试验菌株对2 种以上抗菌药物耐药，多重耐药率为8

3、3.3%，其中2 耐5 株（25%），4 耐7 株（35%），5 耐5 株（25%），7 耐2 株（10%），8 耐1 株（5%）。耐药基因PCR检测表明：tetA和tetB基因的扩增率对四环素类药敏实验相一致。blaTEM基因的扩增率对氨苄西林和头孢氨苄的药敏实验相一致。对氨基糖苷类耐药的菌株中aac(3)Ⅰ和aph(3)Ⅱ扩增率与菌株对庆大霉素、链霉素和新霉素的药敏实验相一致。但是氯霉素类耐药菌株中耐药基因catI 检出率与菌株对氟苯尼考的和氯霉素的耐药性结果相关性不显著。2、动物源性沙门氏菌毒力岛基因

4、mgtC和sopB的PCR 的检测实验以沙门氏菌毒力岛基因为研究对象，根据GenBank 发表的沙门氏菌毒力岛基因序列，分别设计合成了沙门氏菌毒力岛mgtC和sopB的两对引物。以沙门氏菌(ATCC9150)菌株的核酸为模板，经过引物特异性试验，DNA模板灵敏度试验，优化反应条件，成功的建立了快速鉴别以及检测沙门氏菌的双重PCR方法。特异性试验结果表明，引物mgtC和sopB建立的双重PCR仅能扩增出沙门氏菌(ATCC9150)的两段特异性片段，大小分别是500bp 和1000bp。敏感性试验结果表明，检测

5、到的最低浓度是10 CFU/mL。I此方法能够对含有毒力基因的畜禽沙门氏菌进行检验，也能够对致病性沙门氏菌进行快速的检测。3、沙门氏菌毒力岛双重PCR检测方法的应用本研究挑取临床分离的9猪源沙门氏菌，然后对其进行检验用已经建立好的毒力岛双重PCR方法。研究说明：在9 株猪源性沙门氏菌分离株中，有8 株菌株被检测出mgtC基因，此方法的检测率为88.9%，同样也有8株被检测出了sopB基因，检出率为88.9%。通过检测结果显示：本研究所建立起来的双重PCR检测方法灵敏度高、特异性强，该方法对沙门氏菌的快速诊断

6、和对分子流行病学调查提供了有效的保障。上述结果表明，本研究成功建立了沙门氏菌耐药基因PCR检测方法和毒力岛双重PCR检测方法，同时对畜禽沙门氏菌的耐药基因和耐药性进行了对比，结果显示，畜禽沙门氏菌分离株中耐药基因的检出率与药敏实验的结果基本一致。另外建立的快速鉴别以及检测沙门氏菌毒力岛的双重PCR方法具有非常低的检测浓度和非常高的特异性，能对沙门氏菌进行快速的检测，同时可对人畜共患沙门氏菌病的预防和控制提供了理论指导。关键词：沙门氏菌，耐药基因，毒力岛，mgtC基因，sopB基因，PCRIIAbstract

7、Salmonellaisanimportant pathogenthat cancause humanand animaldiseases.The epidemiologicalsurvey demonstratesthatSalmonellapathogenicityislandsare associated with humansalmonellosisdiseases.Virulenceassociated geneswere found thathave much effecton controla

8、nd prevention ofthe disease forfurther understanding the development ofbacterialdiseases.PCR(Polymerase ChainReation)served asbasic technique inthispaper which primer sequenceswere based on specific gene sequ