海洋产蛋白酶菌的分离、培养及其防污活性研究

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1、海洋产蛋白酶菌的分离、培养及其防污活性研究学位论文完成日期：________________指导教师签字：________________答辩委员会成员签字：________________________________________________________________________________________________________________独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注：如没有其他需要特

2、别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日---------------------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权

3、中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日海洋产蛋白酶菌的分离、培养及其防污活性研究摘要海洋微生物由于种类繁多、分布广泛且可以代谢产生大量不同于陆生生物的活性物质而成为生物学和防污工程研究的热点。对海洋微生物的筛选及对其代谢产物防污活性的可行性评价是将其应用于船舶防污领域是否成功的关键因素之一。蛋白酶是一种优良的酶制剂，具有容易获得、生物可降解性和环保、低毒等优点，随着生物防污技术在船舶防污领域的发展，蛋白酶防污受到广泛的关注。本

4、文以新鲜海水为原材料，采用平板菌落划线法分离出海洋微生物蛋白酶产生菌并经紫外辐照诱变选育；通过改变培养基组分，考察不同碳氮源对其蛋白酶活性的影响；通过改变各种环境参数，找出影响该海洋微生物蛋白酶活力环境参数和规律，建立了防污微生物的发酵条件；研究了环境因素对蛋白酶活性的影响；并考察了此株海洋微生物蛋白酶产生菌蛋白酶粗提液对贻贝（Mytilusedulis）、硅藻（Naviculaexigua）、藤壶金星幼虫（Balanusalbicostatuscyprid）、硫酸盐还原菌（SRB）等几种典型海洋污损生物的防污附着效果。通过对此株海洋微生物蛋白酶产生菌培养基进行一系列优化，筛选到此菌株

5、的最佳培养基为：酪蛋白4.0g；玉米浆干粉0.5g；磷酸二氢钾：0.36g；磷酸氢二钠：1.3g；七水合硫酸锌：0.02g；七水合氯化钙：0.002g；酪素水解氨基酸：0.05g；过滤陈海水1L。全面了解海洋微生物蛋白酶产生菌的性质，有助于我们在此基础上提高海洋蛋白酶的活性应用于船舶防污领域。为了充分了解培养过程中各环境参数的变化对海洋微生物蛋白酶产生菌蛋白酶活性的影响，本论文还研究了除培养基组份外的其他影响因素对海洋微生物蛋白酶产生菌蛋白酶活性的影响，包括pH值、培养时间、金属离子等环境因子。福林酚试剂测定蛋白酶活力结果显示：pH值对蛋白酶活性影响显著，随着pH值由6-8.5的变化，

6、蛋白酶活性呈先上升后下降的趋势，且在pH为7时达到最大值；对海洋微生物蛋白酶产生菌进行为期5d的摇床发酵培养，每隔24h测定蛋白酶粗提物酶活力，监测到该菌株蛋白酶活力在第二天时达到最大；高浓度金属离子对海洋微生物蛋白酶产生菌酶活力有一定程度的抑制作用，而低浓度的金属离子对蛋白酶活性抑制不明显。另外，由于低盐度水平不能维持海洋微生物蛋白酶产生菌生长代谢所需渗透压，随着盐度的I降低，蛋白酶活性呈下降趋势。通过对硅藻（Naviculaexigua）、贻贝（Mytilusedulis）、藤壶金星幼虫（Balanusalbicostatuscyprid）、SRB等几种典型海洋污损生物的防污活性测

7、试，考察了海洋微生物蛋白酶产生菌粗提物的防污活性。与对照组相比，加入粗酶液的实验组污损生物在基底材料表面的附着数量明显降低，初步说明此蛋白酶具有良好的防污活性；防污活性测试后，对贻贝和白脊藤壶金星幼虫进行毒性试验，结果表明：当把经粗酶提取液处理后的贻贝和白脊藤壶金星幼虫放入过滤过的陈海水中后，附着数目与对照组相比无明显差别。这进一步证明该蛋白酶不仅防污活性良好而且无毒，环保，是一种潜在的环境友好型防污活性添加剂。白脊藤壶广泛存在于热带和亚热带海