中华蜜蜂转录组测序及雌性蜜蜂基因表达分析

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1、目录3结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．¨⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3131中蜂Dnmt3基因的扩增与鉴定3132中蜂Dnmt3基因与其编码蛋白比较分析3l3,3中蜂Dnmt3基因的转录表达344讨je⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36第四章结论与展望⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．381主要结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯382研究展望⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。附件1Unigene代谢通

2、路⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44攻读硕士期间发表论文情况⋯⋯⋯⋯⋯致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53摘要本研究以中华蜜蜂(Apisceranafdw”d)为材料．通过转录组测序技术获得了中华蜜蜂的转录组信息，并通过数字基因表达谱(DigitalGgeneExpressionProfile．DGE)测序分析比较丁中华蜜蜂蜂王和工蜂的基因表达差异。另外克隆了中华蜜蜂DNA甲基化转移酶3(DNAmethyltnmsferase3．Dnmt3)基因及分析了其mRNA的表达。通过转录组删序技术．获得丁51．581．510条cleanreads对应464Gb核苷酸。这

3、些reads组装成46．999个Unigene，平均长度676bp。基于五个数据库(衄、Swiss—Prot、GO、KEGG和COG)用Blastx进行相似性比对(E值<10。)，共有24．630个unigenes被注释。将获得的转录组数据作为参考数据库，用DGE方法分析比较中华蜜蜂蜂王和工蜂的基因表达差异。分别从蜂王和工蜂中获得5．962．735和5．663．952标签。检测到414个基因有差异表达．蜂王与工蜂相比．其中189个是上调．225个是下调。我们选择了10个差异表达的unigenes，用qRT．PCR验证了在蜂王和工蜂中的表达．结果显示这些基因的qRT-PCR结果与DGE数据相符台

4、。采用RT．PCR技术克隆丁Dnmt3基因：采用荧光定量PCR检测不同发育时期工蜂和蜂王头部的Dnmt3基因mRNA的表达量。结果表明：该基因cDNA序列全长2277b口．编码758个氨基酸残基．预测的蛋白分子量为8824kD．等电点为785。经氮基酸亭列比对，与西方蜜蜂加打mell；feraDnmt3有99％的同源性。该基因在工蜂和蜂王不同发育时期均有表达．1日龄工蜂与7日龄工蜂中没有显著差异(P>O05)，30日龄工蜂中的表达量显著高于1日龄与7日龄工蜂(代005)：蜂王蛹中的表达量显著高于工蜂蛹(尸(o05)：1日龄的蜂王中的表达量显著高于1日龄的工蜂(P<005)：产卵工蜂与产卵蜂王中

5、的表达量没有差异(P>005)。这表明Dnmt3可能与工蜂劳动分工及蜜蜂卵巢发育有关。关键词：中华蜜蜂：转录组测序：数字基因表达谱测序：Dnmt3：表达分析AbstractWiththeApisceranaasmaterialslnthisstlJd、『_weobtainedthetlanscriptomelnfommtJonofAceranucerallabyRNA．seqandcomparedgeneexpressiondiffereneebetweenqueensandworkersofAcerdHaeelⅡ"abydigitalgeneexpression(DGEIanalvsisln

6、additon．cDNAcloningandexpressionanalysisofthe』ceganocera”aDNAmethvhransferase3(Dnml3)genewereperformedUsinghigh—thi'oughputilhiminaRNAsequencingweobtained51591．510ele2mreadscorrespondingto464GbtotaJnueleofidesThesereadswereassembledinto46999uniqueswithameanlengthof676bpBasedonsequencesmaritysearchag

7、ainstthefivepubiindatabases州R．Swissport．GOCOG．KEGGlwithacut—offE-valueof10’usingBlastxatotalof24．630unigeneswereannotatedUsingthesetranseriptomedataasreferencesequencesweanalyzedthegeneexpressiondiffe