pim2基因调控肝癌细胞hepg2凋亡的研究

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1、重庆医科大学硕士研究生学位论文在肝癌细胞系HepG2细胞凋亡机制中的作用，得出主要的实验结果与结论如下：1．肝癌细胞HepG2和正常肝细胞张氏细胞在同一条件下培养，含10％胎牛血清的RPMll640和青、链霉素培养液中，37。C，CO。浓度为5％。培养48小时后进行RT—PCR反应，产物进行琼脂糖凝胶电泳，结果进行半定量分析，发现HepG2中Pim一2的含量明显高于张氏细胞中Pim一2的含量。2．利用质粒载体pGenesi卜1构建针对Pim_2基因特异性的带绿色荧光蛋白的SiRNA质粒pPim-2一shRNAA、B、C。将重组质粒进行酶切及测序证实SiP矾A重组质粒构建成功。3．将重组质粒

2、pPim一2一shRNAA、B、C转染Hep02细胞，荧光镜下观察其在HepG2细胞中的转染效率为85％。将转染TpPim一2一shP,NAA、B、c的Hep62细胞进行RT—PeR反应，再进行半定量分析，结果发现转染了pPim一2一shRNAA的HepG2细胞在48h时Pim-2的含量最低，故选取转染pPim一2一sht矾AA的HepG2细胞和转染阴性对照pPim一2一shRNAC的HepG2细胞进行流式细胞仪、AnnexinV／PE双染法、TUNEL等方法分析细胞周期、凋亡等，结果发现转染pPim-2一shRNAA的Hep02细胞中凋亡细胞数明显多于转染pPim一2一shRNAC的He

3、pG2细胞。关键词：细胞凋亡，癌，Pim一2，Hep02，RNA干扰重庆医科大学硕士研究生学位论文THERESEARCHoFPim．2REGULATINGAPOPTOSISOFHepG2CELLSABSTRACTTherearemanydeathpatternsofcells，butnecrosisandapoptosisarethehotresearchingarea．In1907，Collindescribedacellulardeathpatternwhichwasdifferentfromnecrosisinneurondevelopment．In1950’SClucksmanns

4、ummarizedthecharacteristicsofthisdeathpatternbutitwasoverlooked．Till1970’S，Kerrnameditcoagulativenecrosistodifferentiateitfromnecrosisandrenameditapoptosisin1972．Inrecentyears，moreandmoreresearchesfromthemorphologicalchangestothemolecularlevelsareaboutapoptosis．Morestressisshownonapoptosisintheini

5、tiationanddevelopmentofsurgicaldiseasesTheapoptosis—inducinggeneembracesp53、Fas、ICE、rprlBcl—XS、Bax、Bak、Bad、bid、bikect，Theapoptosis-restraininggeneembracesBcl-2、lAPfamily、Bcl—xl、A1、Bcl-W、Mcl、BAG-1ect。Atpresent。theresearchesaroundp53、Bcl一2、Fasectarepopular．Pimhasattractedmoreattentioninrecentyears．P

6、imfamilybelongstoserine／threoninekinase，whichareinsertedsegmentsinthebloodcellsofratscausedbythereversetranscriptionvirus．Pimfamilyincludes3members．Pim-l，2，3．FoxandotherpeoplefoundPim-2wasgrowth-hormone—dependentedkinase．That6重庆医科大学硕士研究生学位论文meansitmustbetransferedrelyingonthepresenceofsomegrowthfa

7、ctorssuchasIL-3．Butifwithdrawingallthegrowthfactorsinthecultivationsystem，andaddingextrinsicPim一2，cellsstillarealive．Thosecellsappeartobeanti—apoptotic．SoapoptosisdepressionledbyPim一2isgrowthfactors-independent．P