cd39在普萘洛尔治疗血管瘤裸鼠模型中的作用机制探讨

《cd39在普萘洛尔治疗血管瘤裸鼠模型中的作用机制探讨》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、前言婴幼儿血管瘤(infantilehemangioma，IH)是婴幼儿最常见的良性肿[1]瘤之一，发病率高，对皮肤的美容和功能的破坏性大。目前根据内皮细胞的增殖特点对血管样病变进行生物学分类，常分为两大类：血管瘤和血管畸形。血管瘤的组织学改变为内皮细胞克隆扩增和新生血管形成。婴幼儿血管瘤，多数在1岁后能够自行消退，但是对于不能自然消退、出现各种并发症、或者快速生长对美容、生命活动带来严重损害的血管瘤，需要早期干预治疗。[2]2008年，法国医生Léauté-Labrèze等发现普萘洛尔对血管瘤有良好治疗效果。为婴幼儿血管瘤治疗提供了新的方法。国外学者Hoeger[3]等认为普

2、萘洛尔治疗血管瘤可能是通过早、中、远期效应3个途径来完成。其机制可能与β受体阻断导致血管收缩缺血、抑制新血管的生成，诱导增殖的血管内皮细胞凋亡，进而使血管瘤消退等有关。目前普萘洛[4]尔治疗血管瘤的实验研究及报道仍少，其机制仍在探索中。本实验旨在通过研究普萘洛尔治疗血管瘤动物模型过程中CD39、ATP、caspase-3和Ki-67等因子的表达和变化情况，探讨CD39在普萘洛尔治疗血管瘤中的相关作用机制。5材料与方法1.实验材料与仪器1.1瘤…体…标…本…来.源移植的毛细血管瘤组织来自于泸州医学院附属医院小儿外科的两个月大的女性患儿，为腰背部巨大血管瘤。血管瘤瘤体短期内生长迅速

3、，体积较大，其家长强烈要求手术切除治疗。征得患儿父母的知情和同意后，使用标本进行实验。本实验方案通过泸州医学院附属医院科研道德伦理委员会审核通过。1.2实验裸鼠的来.源实验BALB…./.c…裸鼠（….雌….性….）由重…庆比尔实验.动.物…销售有.限公司（许可证号：SYX…K(川….)2011-012提供，共60只，鼠龄（20±3）d，体重（21.21±0.12）g。在泸州医学院附属医院肿瘤科.动.物实.验室饲养。….条件.如下：….①恒温恒湿，相对湿度为76％，温度为25℃。②出风压105KPa，进风压….230KPa，差压＞40Kpa。③无特定.病原体（specificp

4、….athogenfree，SPF）的超净层流动物饲养实验安全柜。④分盒隔.离饲养，每盒4-5只。⑤每….天光照.时间为….12H，….昼夜.交替。⑥由重庆比尔实…验.动物…销售.有限.公…司制作，….提供实验裸鼠专用的饲60料，Co照射消毒。6⑦实验裸鼠饮用水和垫料.都在.高温高.压消毒灭菌60分钟。[5]⑧每隔2-3天更换饲料、饮用水和垫….料1次。1.3主要实验试剂1.3.1CD39兔抗人多克隆抗体：北京博奥森生物技术有限公司1.3.2Ki-67兔抗人多克隆抗体：北京博奥森生物技术有限公司1.3.3Caspase3兔抗人多克隆抗体：北京博奥森生物技术有限公司1.3.4兔S

5、P检测试剂盒（SP-9001）：中杉金桥生物技术有限公司SP工作液试剂盒内容：A：生物素标记羊抗兔IgGB：封闭用新鲜山羊血清工作液C：用于辣根酶标记的链酶卵白素工作液1.3.5ATP检测试剂盒碧云天生物公司A：ATP检测试剂B：ATP检测试剂稀释液C：ATP标准溶液D：ATP检测裂解液1.3.6TUNEL（细胞凋亡）检测试剂盒德国Roche公司1.3.7普萘洛尔片云鹏制药厂1.4主要实验仪器1.4.1游标卡尺：上海精密仪器厂1.4.2电控恒温箱：上海医疗器械厂1.4.3分光光度计71.4.4石蜡切片机：Thermo公司1.4.5图像分析仪（SPOTFLEX）美国DIAGNCS

6、TIC公司1.4.6光学显微镜及摄像系统日本OLYMPUS公司1.4.7Milli-Q超纯水装置纯水机MiiliporeTrading公司1.4.8台式离心机美国X-15beckman公司1.4.9电动匀浆器美国PROScientific公司1.4.10RT-6000酶标仪美国Rayto雷杜公司1.4.11I6000-全自动免疫组化染色仪美国Biogenex公司1.4.12不同型号的移液枪及吸头（10μl、100μl、1ml）；匀浆管：5ml；EP管：100μl、0.2ml、1.5ml、1.4.13超净工作操作台苏州净化设备公司1.4.14低温高速离心机1.4.15-20冰箱1

7、.4.16手术器材：止血钳、手术刀片、眼科剪、皮肤粘合剂、1ml、5ml及10ml规格的注射器1.4.17天平1.4.18灌胃针（外径0.8mm）2.实验方法2.1建立动物模型采用组织块移植法，将在手术室无菌条件下切除的血管瘤组织，少部分标本送病理检查，证实为婴幼儿增生期毛细血管瘤（Mulliken[6]0Standards分类标准），其它剩余标本瘤体组织立即保存于0-4C的无菌湿盒中，转运至中心实验室进行移植。无菌条件下在超净实验工作台8上进行移植操作，先用0.9%盐水冲洗瘤体组织3次，修