mir164c和mir168a的表达与种子活力的关系研究

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1、目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．IAbstract．⋯⋯⋯．．．．．⋯．⋯．⋯．．⋯．⋯⋯．⋯⋯．⋯⋯．⋯．．．．⋯．⋯⋯．．⋯．⋯．．⋯．⋯⋯⋯⋯．．．III1文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11．1植物miRNA的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1．1植物miRNA的发现⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1．2植物miRNA的形成与作用机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11．1．3植物miRNA的生物学功能⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41．1．4植物miR

2、NA的研究方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．71．2种子活力及其调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯141．2．1种子活力的形成及其生理机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．141．2．2贮藏过程中种子活力的变化及其生理机制⋯⋯⋯⋯一141．2．3种子活力的调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．151．3本研究的目的与意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯162材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯172．1实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯j⋯⋯：⋯⋯⋯⋯⋯．．172．1．1植物材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯172．1．2菌种及质粒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯172．1．3引物序列⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯172．1．4试剂和试剂盒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182．1．5仪器与设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯202．2实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．202．2．1种子的干燥与老化处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯202．2．2种子萌发率的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．212．2．3miRl64c和1NRl68a表达量的Real．timeqPCR检测⋯212

4、．2．4miRl64c、miRl68a沉默载体的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一242．2．5miRl64c、miRl68a过表达载体构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．312．2．6农杆菌介导的目的基因的kasalath遗传转化⋯⋯⋯⋯323结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯363．1miRl64c和miRl68a表达与拟南芥种子耐老化能力的关系363．1～拟南芥miRl64c与miRl68a突变体种子和野生型种子耐老化能力的差异⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．363．1．2拟南芥突变体种子和野生型种子的miRl64c

5、和miRl68a的表达量差异⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．373．2miRl64c和miRl68a的表达与水稻种子活力的关系⋯⋯⋯383．2．1水稻种子发育过程中种子活力形成与miRl64c和miRl68a表达量变化的关系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．383．2．2自然贮藏条件下水稻种子的活力变化与miRl64c和miRl68a表达量的关系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．413．3miRl64c和miRl68a过表达和沉默基因的水稻(kasalath)遗传转化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯423．3．1

6、miRl64c和miRl68a过表达和沉默基因的克隆与改造423．3．2miRl64c和miRl68a过表达载体和沉默载体的构建．．433．3．3农杆菌介导的水稻kasalath的遗传转化⋯⋯⋯⋯⋯⋯443．3．4转基因水稻的分子鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一453．4T0代转基因植株的表型初步观察⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯474讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．49参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一51附录一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、58附录二⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．64致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯65湖南师范大学学位论文原创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．66miRl64c和miRl68a的表达与种子活力的关系研究1文献综述1．1植物miRNA的研究进展1．1．1植物miRNA的发现继1993年，Ambros研究小组的Lee[1】等人用遗传分析法在秀丽线虫(c．elegents)中首次发现了miRNA之后，2002年，Reinhart[2】首次从拟南芥中克隆到miRNA，由此开启了

8、研究植物miRNA的大门。到目前为止，已经在拟南芥(Arabidopsisthaliana)、水稻(Oryzasative)、玉米(Zeamays)、苔藓(bryophyta)、烟草(Nicotianatabacum)、卷柏(Selaginellamoellendorffii)等【2‘6】植物中发现了大量的miRNA。迄今为止，m