双标大鼠骨髓间充质干细胞治疗颈总动脉创伤mri活体示踪的研究

《双标大鼠骨髓间充质干细胞治疗颈总动脉创伤mri活体示踪的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名经研究生签名：比型2二大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在

2、保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。论文的公布(包括刊登)授权东南大学研究生院办理。～签名垃聊虢嵴2日俨中文摘要双标大鼠骨髓间充质干细胞治疗颈总动脉创伤的M砒活体示踪研究东南大学医学院博士研究生曹爱红导师滕皋军目的以不同方法体外分离培养大鼠骨髓I’日J充质干细胞，应用超顺磁性氧化铁(SPIO，Supe叩aramagneticironoxide)即Fe203-多聚左旋赖氨酸(PLL)的偶联物及羰花青荧光染料(DiI1，1’．dioctadecyl一3，3，3’，3’-tetramethylin

3、do—Carbocyanineperchlorate)标记大鼠骨髓问充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)，构建BMSCs．SPIo．DiI生物探针，同种异体移植治疗大鼠颈总动脉创伤，应用7Tmicro—MR仪进行活体成像，为干细胞移植并活体无创示踪提供实验依据。方法无菌条件下分离大鼠双下肢，低糖DMEM培养液冲出骨髓，分别运用全骨髓贴壁法和密度梯度离心法体外分离骨髓间充质干细胞，利用差速贴壁原理对细胞进行纯化扩增，在倒置相差显微镜下连续观察细胞的形态变化，体外培养、传代、扩增。制各Fe203-PLL，对分离纯化并

4、传代培养的大鼠BMscs标记Fe203．PLL，细胞移植前，羰花青荧光染料标记，构建BMSCs．sPIo．DiI生物探针。普鲁士蓝染色显示细胞内铁，荧光显微镜显示红色荧光，胎盼蓝拒染法检测细胞活率，观察标记前后细胞的生长状况。12只急性颈总动脉创伤大鼠模型分成实验和对照两组，将标记细胞(实验组，胛=6)和未标记细胞(对照组，，z=6)同种异体经过尾静脉移植入大鼠体内，在移植前、移植后3h及3、7、12d应用MR的PD．T2及3D．FLASH序列对大鼠颈总动脉进行活体成像，测量创伤处管壁信噪比(si印al-to．noiseratio，SNR)

5、，并与相应颈总动脉组织切片普鲁士蓝染色及荧光显像对照。结果与密度梯度离心法相比，全骨髓贴壁法分离获得的骨髓间充质干细胞贴壁时东南人学博上学位论文问短，增殖快，经传代后能够纯化。原代培养8～lOd后可分离得到骨髓间质干细胞，且骨髓充问质干细胞体外培养生长状况良好，呈均一的成纤维细胞样，传代周期为3～4d。BMSCs—SPIO—DiI标记率近loo％，普鲁士蓝染色及电镜显示蓝色铁颗粒位于MSCs胞质内，荧光显微镜下胞浆内示红色荧光。标记对细胞活率及生长状况无明显影响。实验组和对照组移植前、移植后3h及3、7、12d创伤颈动脉的SNR分别为14．

6、52±2．14，13．47±1．13，4．22±2．16，5．51±2．15，12．90±1．56；14．3l±3．12，15．12±2．23，14．10±1．79，14．63±3．47，14．17±2．82。与注射前比较，实验组3、7d创伤颈总动脉的SNR下降，差异具有统计学意义(D“胛刀甜f检验，f值分别为10．03，8．Ol，尸值均<0．05)，3h及12d时sNR虽仍较低，但差异无统计学意义(Durulett检验，f值分别为1．09，1．25，尸>O．05)。对照组移植后各时间点与移植前比较，SNR改变差异无统计学意义(方差分析，F

7、=O．139，尸>O．05)。组织学示红色荧光及普鲁士蓝阳性细胞主要分布于颈总动脉创伤周阐病变区。结论采用全骨髓贴壁法可稳定获得均质性良好的大鼠骨髓fnJ充质干细胞，效果优于密度梯度离心法。SPIO—DiI叮以对BMscs进行安全有效的标记，双标构建纳米生物探针；标记对细胞活率及生长状况无明显影响。7Tmicro．MR仪可对磁粒子标记的BMscs经尾静脉移植后定向归巢至颈总动脉创伤处进行活体示踪，创伤处血管组织学示红色荧光及普鲁士蓝染色阳性，证实了MRl低信号改变系移植的干细胞归巢。关键词骨髓间充质干细胞；细胞培养；干细胞；生物学标记；生物

8、探针；磁共振成像；移植；颈总动脉英义摘要E]NGLISHABSTRACT砌讨阳trac“ngofdual-labeledmesenchymalstemce¨shollIingin