dna修复基因遗传多态性与上皮性卵巢癌患者铂类化疗临床预后关系的研究

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英文摘要treatedbyplatinum-basedchemotherapy．4Themedianoverallsurvival(0S)ofpatientscarryingLys／LysandLys／Gln+Gln／GlngenotypeofXPCLys939Glnpolymorphismwere31．1and27．8，respectively．Kaplan-MeierestimatesdemonstratedthatstatisticalsignificantdifferencewasfoundbetweenthegenotypesandPFSofEOCcases(P=0．048)．Cox’Smultivariateanalysissuggestedthatthepatientsofepithelialovariancancerwi也theGinallelehadanincreasedriskofdeath(mbl．75；95％CI=1．06·2．91)comparedwiththosewiththeLys／Lysgenotype．5TherearenoassociationsbetweentheXPC(Ala499Val，PAT十／-)，ⅫD(Asp312Asn，Lys751Gln)，XRCCl(Ar9194Trp，Ar9280HisandAr9399Gln)polymorphismsandpatientssurvival、析thepithelialovariancancerwhentreatedbyplatinum-basedchemotherapy．Conclusion：1NosignificantdifferencesingenotypeandallelotypedistributionsofeightSNPs(XRCC1Ar9194Trp，Ar9280His，Ar9399Gln；XPDAsp312Asn，Lys751GlnandXRCC1Ar9194Trp，Ar9280His，Ar9399Gln)werefoundbetweenrespondersandnotrespondersofallpatients．2TherealenoassociationsbetweentheXPCAla499Val，Lys939Gln，PA飞+hXPDAsp312Asn，Lys751GinandXRCClAr9194Trp，Ar9280His，Ar9399Glnpolymorphismsandpatientsrecurrencewithepithelialovariancancerwhentreatedbyplatinum-basedchemotherapy．3111eresultsindicatedthattheXPCLys939Glnpolymorphismmaycorrelatewithclinicaloutcomeofpatientswithepithelialovariancancerwhentreatedbyplatinum-basedchemotherapyinNorthernChina．4TherearenoassociationsbetweentheXPC触a499Val，PAT+／一；XPDAsp312Asn，Lys751GlnandXRCClAr9194Trp，Ar9280His，Ar9399GlnpolymorphismsandOSofepithelialovariancancerpatientswhentreatedbyplatinum．basedchemotherapy．Keywords：XPC，XPD，XRCCl，epithelialovariancancer，platinum一5 英文摘要basedchemotherapy，clinicaloutcome6 研究论文DNA修复基因遗传多态性与接受铂类化疗的上皮性卵巢癌患者临床预后关系的研究前言在卵巢原发性恶性肿瘤中，起源于表层上皮组织的上皮性卵巢癌(EOC)约占90％。目前，以铂类为基础的联合化疗为EOC患者术后的一线化疗方案，约70％的病人可以达到临床完全缓解【l】。尽管患者铂类化疗的初始应答率较高，但多数病人在术后3年内出现肿瘤复发，导致患者的5年生存率仅为20％．、一40％12]。肿瘤细胞对化疗药物，尤其是铂类化合物的耐药被认为是患者预后不良的主要原因。因此，如果能够找到铂类抵抗的分子标记物，用来靶向逆转铂类耐药以改善患者预后，将会是卵巢癌治疗中的重大突破。铂类药物如顺铂、卡铂、草酸铂等的作用机理是通过进入肿瘤细胞与DNA结合，形成Pt-DNA加合物，导致DNA链内或链间交联，引起DNA复制障碍，从而抑制肿瘤细胞分裂，导致肿瘤细胞凋亡。DNA损伤修复系统如果能够及时修复Pt-DNA加合物，则会导致铂类药物的耐药。正常人体内DNA损伤修复主要由碱基切除修复(BER)、DNA双链断裂修复(DDSBR)、错配修复(Mc、偶)及核苷酸切除修复(Ⅻ披)4种途径组成。针对不同类型的DNA损伤，可以由不同的途径进行修复。其中NER和BER途径与铂类化疗的关系最密切，是修复Pt—DNA加合物的最主要的途径。NER途径通过募集20多个基因产物到达DNA损伤区，“拆迁”走大量Pt-DNA加合物来修复和重建DNA的完整性，及时J恢复化疗药物导致的损伤，使肿瘤细胞得以存活。BER途径的XRCCl可作为脚手架蛋白，可以与DNA连接酶Ⅲ、DNA聚合酶B、多聚二磷酸腺苷、核糖聚合酶形成复合物，参与因离辐射、氧化损伤等引起的碱基切除修复和单链断裂修复，对维持基因的稳定性发挥十分关键的作用。XPC、XPD基因为NER系统的重要成员，XPC可在NER的初始阶段与HR23B结合成复合物，使NER过程得以启动，并允许XPD进入DNA的损伤部位；XPD是进化保守的DNA解旋酶，可使受损的DNA双链解螺旋。XRCCl是BER系统的重要成员，XRCCl主要参与 研究论文电离辐射、氧化损伤等引起的碱基切除修复及单链断裂修复。个体DNA损伤修复能力与铂类药物的抗肿瘤效果密切相关。而遗传差异会导致个体间损伤修复能力的不同。单核苷酸多态性(SNP)在人类遗传变异中最常见，约占所有已知多态性的90％以上。它是指正常人群中同一基因位点存在两种或两种以上等位基因，而且各等位基因均具有很高的频率(大于1％)。即机体基因组可以通过SNPs的形式导致个体间DNA损伤修复能力的变异。而SNPs产生功能性的影响主要是由其在基因组的特定位置决定的【3】。NER及BER途径的SNPs可能会改变其转录蛋白质的功能及DNA修复效率，导致个体对铂类药物反应的不同。国外有关DNA修复基因多态性与卵巢癌患者对铂类药物的敏感性及生存关系已有相关报道，但研究结果不尽相同。而且DNA损伤修复需要多种酶和基因的一系列作用，单一修复途径中的单一基因在损伤修复中的作用有限，单一分析某个酶或基因也不足以体现DNA修复过程的本质复杂性。但是截止目前，以修复途径联合形式的多个修复基因的多态性与上皮性卵巢癌铂类化疗的研究报道较少。本研究拟在探讨NER和BER途径的核心基因XPC、XPD和XRCCl单核苷酸多态(SNPs)与上皮性卵巢癌患者铂类化疗应答和预后的关系。材料与方法1主要实验仪器及设备SW-CJ一2FD型净化工作台离心机LⅪ一64—01台式离心机PQ．1600A电子天平PB3002．SPCR扩增仪Mastercycler5333DYY-IIl2稳压稳流电泳仪医用微波炉(MicrowaveOven)EppendorfResearch移液器DYY-III28A型电泳槽苏州安泰空气技术公司北京医疗仪器修理厂上海培清科技有限公司瑞士Mettler公司德国Eppendorf公司北京市六一仪器厂上海中达医学应用研究所德国Eppendorf公司北京市六一仪器厂 研究论文202．2A型电热恒温烤箱MDF—U50V．86℃低温冰箱凝胶成像分析仪Alphalmager22002主要实验试剂Triton-X100Tris(三羟甲基氨基烷)EDTA(乙二胺)SDS(十二烷基磺酸钠)蛋白酶K10mmol／Lm叮TPS琼脂糖溴化乙锭100bpDNAladderTaq．DNA聚合酶限制性内切酶SaclI，A玎Pv证I，StyI引物合成3研究对象上海阳光实验仪器公司日本三洋公司美国Anlai公司SigmaMerck，Germany北京赛百盛生物有限公司Sigma北京赛百盛生物有限公司大连宝生物有限公司北京赛百盛生物有限公司213例EOC患者为2001年12月至2008年6月于河北医科大学第四医院妇产科进行手术治疗的北方汉族妇女，术前未行放射或化学治疗，术后均经组织病理学检查确诊。其中浆液性癌119例(56％)，粘液性癌21例(10％)，宫内膜样癌45例(21％)和低分化腺癌28例(13％)；临床分期采用国际妇产科联盟(FIGo)标准(2000年)，其中早期(I~II期)卵巢癌68例(32％)，晚期(Ⅲ～Ⅳ期)卵巢癌145例(68％)；中位年龄53岁(21岁-79岁)。所有研究对象均有知情同意。4外周血白细胞DNA的提取采集每位研究个体的静脉血5mL，经枸橼酸钠抗凝，置40C冰箱保存，并于采血后l周内提取外周血白细胞DNA。DNA提取采用蛋白酶K消化．饱和氯化钠盐析法【4】。外周血5mL加冷蒸馏水至50mL，2500rpm室温离心10min，弃上清。重复2～3次至红细胞完全裂解。加入预冷的0．1％Triton．X10045mL同上离心去上清，洗 研究论文涤1~2次。沉淀加3mLDNA提取液，充分混匀，悬浮白细胞，加10％SDS150pL(终浓度O．5％)剧烈振荡至无凝块。加入蛋白酶K至终浓度为100btg／mL(1mg／mL约400uL)，混匀，37℃消化过夜。然后，加入5MNaCl1．2mL，剧烈振荡15s，2500rpm室温离心15min。将上清倒入另一离心管中，弃沉淀。上清中加入100％乙醇8mL，反复颠倒混匀，挑出DNA至高压灭菌的Eppendorf管中，以70％乙醇洗涤l~2次，倒置Eppendorf管并使乙醇挥发干净。以200rtLTE溶解DNA，4"C至少放置24h，彻底溶解后经电泳或测OD值定量。5ⅫCSNPs基因分型采用聚合酶链反应．限制性片段长度多态性(polymerasechainreaction-restrictionfragmentlengthpolymorphism，PCR-RFLP)方法XPC基因进行第8外显子和第15外显子SNPs基因分型；采用引物介导的限制性．聚合酶链反应(primerintroducedrestrictionanalysis．polymerasechainreaction．PIR-PCR)方法进行第9内含子SNP基因分型。XPC基因第8外显子PCR反应体系为20uL，其中模板DNA100ng，10xPCR缓冲液(15mmol／LMgCl2)1．5pL，TaqDNA聚合酶(天为时代公司，北京)1U，lOmmol／LdNTPs0．4pL，上游引物(5’．尉溘GGACCCAAGCTTGCCCG-3’)和下游引物(5'-CCCAC”mCTCCTGCTCACAG-3。)各1“L。PCR反应条件为：94℃预变性5min后，然后94"C变性45s、63。C退火45s、72℃延伸45s，35个循环后，72℃继续延伸7min。PCR产物经限制性内切酶SaclI(赛百盛公司，北京)于37"C酶切16h后，进行4％琼脂糖凝胶电泳。C／C基因型存在勋c口的识别位点产生131bp和21bp两条DNA片段，而们基因型缺乏SaclI的识别位点保持原有PCR后的152bp的片段，C厂r基因型则显示为152bp、13lbp和21bp3条片段(Fig．1)。XPC基因第15外显子PCR反应体系为20pL，其中模板DNA100ng，10xPCR缓冲液(20mmol／LMgCh)2pL，TaqDNA聚合酶(赛百盛公司，北京)2．5U，10mmol／LdNTP$0．5I．tL，上游引物(5'-GGAGGTGGAC：TCTcT-rCTGATG-3’)和下游引物(5'-TAGATCCCAGCAGATGACC．3’)各2旺。PCR反应条件为：94℃预变性5min后，然后94℃变性45s、64。C退火45s、72℃延伸lmin，35个循环后，72。C继续延伸7min。PCR产物经限制性内切酶PvuJI(宝生物公司，大连)于37℃酶切16h后，进行2％琼脂糖凝 研究论文胶电泳。C／C基因型存在nz埘的识别位点产生582bp和183bp两条DNA片段，而从基因型缺乏PvulI的识别位点保持原有PCR后的765bp片段，A／C基因型则显示为765bp、582bp和183bp3条片段(Fig．2)。XPC基因第9内含子PCR反应体系为20pL，其中模板DNAlOOng，10×PCR缓冲液(20mMMgCl2)2pL，TaqDNA聚合酶(赛百胜公司，北京)2．5U，lOmmol／LdNTPs0．5I_tL，上游引物(5'-TAGCACCCAGCAGTCAAAG-3’)和下游引物(5'-TGTGAATGTGCTTAATGCTG．3’)各2pL。PCR反应条件为：94"C预变性5min后，然后94。C变性45s、60。C退火45s、72℃延伸lmin，35个循环后，72"C继续延伸7min。PCR产物经3％琼脂糖凝胶电泳。XPC基因第9内含子如包括83个多聚AT碱基的插入，并在1457．1461位置存在GTAAC5个碱基的缺失，则为PAll+；如无多聚AT的插入，则为PAT-。PAT+／+基因型为344bp，PAT．／-基因型为266bp，PAT．／+基因型为344bp和266bp(Fig．3)。为进行基因型检测的质量控制，每一批PCR反应均以灭菌蒸馏水替代模板DNA作为阴性对照，XPC基因第8及第15外显子各随机挑取10％的DNA标本进行重复实验，XPC基因第9内含子的扩增产物随机挑取各基因型一例进行测序。6XPDSNPs基因分型采用聚合酶链反应邛艮制性片段长度多态性(polymerasechainreactio—n—restrictionfragmentlengthpolymorphism，PCR-RFLP)方法进行XPDSNPs基因分型。XPD基因第10外显子PCR反应体系为20pL，其中模板DNA100ng，10×PCR缓冲液(15mmol／LMgCl2)2斗L，TaqDNA聚合酶(天为时代公司，北京)1U，10mmol／LdYTPs0．4pL，上游引物(5'-CTGTTGGTGGGTGCCCGTATCTGTTGGTCT-3’)和下游引物(5'-TAATATCGGa3CTCACCCTGCAGCACTTCCT-3’)各1．51xL。PCR反应条件为：94℃预变性5min后，然后94℃变性45s、69。C退火45s、72"C延伸lmin，35个循环后，72℃继续延伸7min。PCR产物经限制性内切酶StyI(宝生物公司，大连)于37℃酶切16h后，进行3％琼脂糖凝胶电泳。PCR产物为751bp，野生基因型Asp／AspStyl酶切后产生507bp和244bp2个片段；杂合子Asp／Asn产生507bp、474bp、244bp和33bp4个片段；而突变型Asn／Asn产生474bp、 研究论文244bp和33bp3个片段(Fig．4)。XPD基因第23外显子PCR反应体系为20btL，其中模板DNA100ng，10xPCR缓冲液(M92+free)21aL，Mg+溶液(25mmol／LMgClz)1．29L，TaqDNA聚合酶(赛百盛公司，北京)2．5U，10mmol／LdNWPs0．59L，上游引物(5’一GCCCGCTCTGGATTATACG．3’)和下游引物(5'-CTATCATCTCCTGGCCCCC一3’)各1．59L。PCR反应条件为：94℃预变性5min后，然后94。C变性45s、63℃退火45s、72℃延伸45s，35个循环后，72℃继续延伸7min。PCR产物经限制性内切酶Pst／(赛百盛公司，北京)于37℃酶切16h后，进行3％琼脂糖凝胶电泳。PCR产物为436bp，野生基因型Lys／Lys经n￡，酶切后产生290bp和146bp2个片段；杂合子Lys／Gln产生290bp、227bp、146bp和63bp4个片段；而突变型Gin／Gin产生227bp、146bp和63bp3个片段(Fig．5)。为进行基因型检测的质量控制，每一批PCR反应均以灭菌蒸馏水替代模板DNA作为阴性对照，XPD基因第10及第23外显子各随机挑取10％的DNA标本进行重复实验。7XRCClSNPs基因分型XRCCIAr9194Trp基因型检测的PCR反应体系为201xL，其中模板DNA100ng，lOxPCI蠼冲液("含'MgCl215mmol／L)2．4pL，染料2p．L，TaqDNA聚合酶(天根生化科技有限公司)1．0U，dNTPs200pmol／L，上游引物(5'-GCCAGGGCCCCTCCTTCAA．3’)和下游引物(5'-TACCCTCAGACCCACGAGT-3’)各250nmol／L；PCR反应条件为：94"C预变性5min，然后94℃变性45s，58。C退火45s，72℃延伸45s，35个循环后，72℃继续延伸7min。PCR扩增产物为491bp，经限制性内切酶MspI(上海生工生物工程有限公司)于37℃消化过夜后，进行4％琼脂糖凝胶电泳分析基因型。Arg／Trp基因型产物为313bp、293bp和178bp，Arg／Arg基因型为293bp和178bp，20bp，Trp／Trp基因型为313bp和178bp(Fig．6)。XRCClAr9280His基因型检测的PCR反应体系为20I．tL，其中模板DNAlOOng，10xPCR缓冲液(叠TMgCl215mmol／L)2．4ItL，染料2此，TaqDNA聚合酶(天根生化科技有限公司)1．0U，dNTPs2001．tmol／L，上游引物(5'-GGATTCTTGGCTTGGCGCAGGA一3’)和下游引物(5'-G删CTGGGTAAAATGAGGCTG-3’)各250nmol／L；PCR反应条件为：94℃预变12 研究论文性5min，然后94。C变性45s，65．5℃退火45s，72℃延伸lmin，35个循环后，72℃继续延伸7min。扩增产物为201bp，取适量与限制性内切酶如aI(北京赛百盛基因技术有限公司)于37℃温育过夜，酶切产物于4％琼脂糖凝胶电泳分离。Arg／His基因型产生201bp、145p和56bp两个片段，Arg／Arg基因型则为145bp和56bp两个片段(Fig．7)。XRCClAr9399Gln基因型检测的PCR反应体系为20}tL，其中模板DNAlOOng，10xPCR(含MgCl215mmol／L)缓冲液2．49L，染料2laL，TaqDNA聚合酶(天根生化科技有限公司)1．0U，dNTPs200pmol／L，上游引物为：(5’．1℃CTCCACCTTGTGCTTTCT．3’)，下游引物为：(5'-AGTAGTCTGCTGGCTCTGGG一3’)，各250nmol／L；PCR反应条件为：94"C预变性5min，然后94℃变性45S，62℃退火45S，72℃延伸45S，35个循环后，72℃继续延伸7rain。扩增片段长度为242bp，经限制性内切酶MspI(上海生工生物工程有限公司)于37℃酶切过夜后，进行4％琼脂糖凝胶电泳分析基因型。Arg／Cln基因型产生两个片段为242bp、148bp和94bp，Arg／Arg基因型产生一个片段为148bp+94bp，Gin／Gin基因型产生一个片段为242bp(Fig．8)。为进行基因型检测的质量控制，每一批PCR反应均以灭菌双蒸水替代模板DNA作为阴性对照，并随机挑取10％的DNA标本进行重复实验。8化疗方案及疗效评价纳入本研究的213例EOC患者均按FIGO分期施以相应手术。术后1~2周静脉给予铂类药物为基础的化疗，FIGOIB～IIC期给予3～5个疗程，而FIGOIIIA-IV期则为6．9个疗程。以治疗缓解间期(treatment-fleeinterval，ⅡI)来评价铂类应答：如TFI<6，即化疗过程中或初次化疗结束6个月内出现复发，为化疗不应答或铂类耐药；如TF眨6为铂类应答。以化疗后复发和生存的比率评价临床疗效：评价复发的指标为无疾病进展生存时间(progression-freesurvival，PFS)，即从化疗开始至肿瘤病灶进展或出现癌症相关症状的时间；评价生存预后的指标为总生存时间(overallsurvival，OS)，即从化疗开始至死亡的时间。9统计学分析全部数据采用SPSS13．0进行处理：以杞或Fisher确切检验比较患 研究论文者各基因型铂类应答的差异，OR值及95％CI以非条件Logistic回归模型计算，并经患者年龄、肿瘤分化程度和病理类型的校正。生存分析采用Kaplan—Meier法，各因素水平间比较用Log—rank及Breslow分析，Cox回归模型进一步分析预后相关因素(患者年龄、肿瘤分化程度、病理类型、临床分期、残余病灶)。P值均为双侧概率，以P<0．05为差异有统计学意义。结果l一般特征经#检验，XPCAla499Val，酗LT_机，Lys939Gln；XPDAsp312Asn、Lys751Gln；XRCClAr9194Trp、Ar9280His、Ar9399Gln的基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0．05)。以患者确诊时年龄、病理类型、临床分期、分化程度、残余病灶分层分析，XPCAla499Val、Lys939Gln、PAT+／一：XPDAsp312Asn、Lys751GinXRCClAr9194Trp、Ar9280I-Iis、Ar9399Gln的基因型频率分布在各组间也均未发现统计学差异(P>0．05)。28个SNPs与卵巢癌患者铂类化疗应答的关系初次化疗结束后，213例EOC患者中140例对铂类化疗应答，应答率为66％；73例(34％)对铂类化疗不应答。在铂类化疗应答组与不应答组之间XPCAla499Val，PAl斗／-，Lys939Gln；XPDAsp312Asn、Lys751GIn；XRCClAr9194Trp、Ar9280His、Ar9399Gln多态位点的基因型和等位基因频率分布无统计学差异(P>0．05)。3XPCAla499Val，PAT+／一，Lys939Gln多态性与患者临床预后的关系XPC基因Ala499Val，必LT+／．，Lys939GlnSNPs的基因型分布与临床预后(PFS、OS)的关系见表7、表10。携带XPCLys939Gln多态Lys／Lys基因型和Gin等位基因(Lys／Gln+Gln／Gln基因型)的患者中位无疾病进展生存时间(PFS)分别为25和12个月，中位总生存时间(overallsurvival，OS)分别为31．1和27．8个月，Kaplan-Meier单因素分析，两者相比有统计学差异(P值分别为0．039和0．048)(Fig．9．A、B)。经Cox回归多因素分析，携带Gin基因型可能明显降低EOC患者的总生存时间(瑚净1．75，95％CI=1．06--2．91)。而XPCAla499Val、PAT+／一SNPs位点的基因型频率 研究论文分布与EOC患者铂类化疗预后无关(P>0．05)。4XPDAsp312Asn、Lys751Gln；XRCClAr9194Trp、Ar9280His、Ar9399GlnSNPs的基因型分布与临床预后的关系未发现XPDAsp312Asn、Lys751Gln和XRCClAr9194Trp、Ar9280His、Ar9399Gln5个单核苷酸多态位点的基因型频率分布与上皮性卵巢癌预后的相关性。15 研究论文344bp266bp12345678500bp200bpFig．3TheXPCPAT-／+SNPgenotypingbyPIRA-PCRPrimerintroducedrestrictionanalysisPeR,theXPC-／+PCRproductsweresubjectedtoelectrophoriseson3％agarosegel．1,3，6：-／+、hetetozygousgenotype；2：十／+homozygousgenotype；4，5：一／-homozygousgenotype；7：negativecontrol；8：lOObpDNAmolecularmarker500bp12345678910751bp507bp474bp244bpFig．4TheXPDAsp312AsnSNPgenotypingbyPCR-StyIdigestionTheXPDAsp312AsnPCRproductsweredigestedwithStyIrestrictionenzymeandsubjectedtoelectrophoriseson3％agarosegel．1：lOObpDNAmolecularmarker；2,4，6，7，8：G／Ghomozygousgenotype；3：A／Ahomozygousgenotype；5，9：G／Ahetetozygousgenotype；10：PCRproduct17 研究论文500bpt23456789436bp戮吕146bpFig．5TheXPDLys751GingenotypingbyPCR-Pst／digestionTheXPDLys751GlnPCRproductsweredigestedwimA玎restrictionenzymeandsubjectedtoelectrophoriseson3％agarosegel．1：100bpDNAmolecularmarker；2：C／Chomozygousgenotype；3,4，5，8：刖Ahomozygousgenotype；6,7，9：A／Chetetozygousgenotype；10：PCRproductl234567300bp200bpFig．6XRCClArg194TrpSNPgenotypingbyPCR-MspIdigestionLanes2，3，4：AregArggenotype；Lanesl，5：Arg／Trpgenotype；Lane6：Trp／Trpgenotype；Lane7：100bpDNAmarker18 研究论文1234567Fig．7XRCClAr9280HisSNPgenotypingbyPCR-RasIdigestionLanesl，3，5：Arg／Arggenotype；Lanes2，4：Arg／nisgenotype；Lane6：PCRproduct；Lane7：100bpDNAmarker1234567800bpFig．8XRCClAr9399GlnSNPgenotypingbyPCR-MspIdigestionLanes4：Arg／Arggenotype；Lanesl，2，3：Arg／Gtngenotype；Lane5，6：Gln／Glngenotype；Lane7：PCRproduct；Lane8：100bpDNAmarker19 研究论文附表TablelPCRconditionsforXRCC1，XPC，XPDrestrictionfragmentlengthpolymorphisms．PolymorohismPrimersequenceProductAnnealhagsize(bp)temp／restriction皇望!坌竺坠型型!皇!曼!i丝!丑RoCJF：GCCCC(订℃CCAGGTA49159．1℃／Mspl／A唱1941坤(C门了R：AGCCCC从C认CCClTrCACTC=293，178，20Exon6T=391．178丑ROCJF：CCAGTGGTGClAACCTAATC20158．4℃／RasI／At9280His(G／A)R：CACTCA(起ACCAClACCACAG=145．56Exon9A=201XRCClAr9399Gln(G／A)ExonlO艘cAla499VaI(C／T)Exon8X_PCP》西七i．Intron9ⅫCLys939Gln(A／C)Exonl5职DAsp312Asn(G／A)Exonl0F：CCCCAAGTACAGCCAGGTC242R：TGTCCCGCTCCT(、TCAGl’AGF：TAAGGACCCAAGCTrGCCCGl52R：CCCACTr丌CCTCCTGCTCACAGF：TAGCACCCAGCAGTCAAAGR：TGTGAALTGTGCTTA文眦TG+：344一：266F：GGAGGTGGAC‘rCTC7ITCTGpd’G765R：1’AGATCCCAGCAGATGACCF：CTGTTGGTGGGTGCCCGTATCTG751TTGGTCTR：TAAIArCGGGGCTCACCCTGCAGCACTTCCT62．8℃／MspI／G=148。94A=24263℃／SaelFC=131,21T=15260℃64‘c|PvmI|C=582，183A=76569℃／＆埘A=474，244。33G=507，244XPDE：GCCCGCTC1GGm§矗～CG43663℃|Ps娃|Lys751Gln(A／C)R：CTATCATCTCCTGGCCCCCC=227，146，63Exon23A--290，146Table2Characteristicsofselected8SNPsinDNArepakgene．MAFb缈洫．．．PathwayGeneSNPIDLocusLocation。．廿。H印mau翟≯Pa缸en乜(c涵)NER)口PCAl“99Ⅷrs2228000C>Texon80．3190．300106／76／30XPCxvc．pAr瀑蒜却协卜intron90．632-28／100／84XPCI棚39Glars2228001A>Cexon150．4150．37872／105／36NER)aPDA∞312A钮rsl799793G>Aexon100．1200．067163／47／2XPDLys751汕rsl3181A>Cexon23O．1170．185166／4413BERXRCClArgl94Trprsl799782C>Texon6O．3220．24498／93／22XRCCl～e,280msm25489G>Aexon90．1110．107167／43／2型堡!蝴鳗堕咝!垒墨2鱼丛皇婴!Q旦：兰ZZQ：圣2兰!!Q堡型!!awildhomozygote／heterozygote／Varimathomozygote．bⅣ吣．minorallelefrequency．21 研究论文Table3Clinicalcharacteristicsaccordingtoplatinum—resistanceNotresponderAdjustedORPvalueCharacteristicsrespondern(％)丛塑Age<50≥50FIGOstageI．ⅡIII-ⅣGrade12395％52(75．4、88(61．1)14(87．5)126(64．0)14(70．0)67(89．3)59(50．0)tumorresidualsize014(70．0)