人源性噬菌体抗体库与rhg-csf基因工程scfv抗体的研究

《人源性噬菌体抗体库与rhg-csf基因工程scfv抗体的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、浙江大学博十学位论文本研究的创新点G—CSF(粒细胞集落刺激因子)是人体的一种『F常成分，如何获取针对它的高亲和人源性单克隆抗体一直是个难题。噬菌体抗体库技术的出现为解决这一难题提供了新的途径。本研究以重组人细胞因子rhG—CSF作为靶抗原，从构建的抗体库中筛选到基因结构明确，免疫亲和力稳定的抗rhG．CSF阳性克隆，并对抗体蛋白的基因序列、表达及生化性质进行了深入研究。结果表明研究所获得的抗体为功能区域完整的全人单链抗体，有潜在的研究和诊疗用价值；同时也表明从抗体库中获取抗人类细胞因子蛋白的单克隆抗体的可行性，其建立的平台技

2、术和通用程序有普遍的适用性。研究结果为阐明抗rhG．CSF噬菌体抗体基因的结构特性及进一步通过基因改造提高单链抗体的应用价值打下了基础。单链抗体(ScFv)是由抗体重链可变区VH和轻链可变区VL通过一段连接肽连接而成的重组基因工程抗体蛋白。由于其分子量小(仅为完整抗体分子大小的l／6)、穿透力强、免疫原性低且有利于基因工程操作等优点，适合作为高效靶向治疗分子，因而具有良好的应用前景。近年来人源化和全人源单克隆抗体因其能降低或免除HAMA反应及较好的药代动力学成为抗体药物科研开发的前沿，通过构建高库容的人源抗体库直接获取全人源抗

3、体是一条高效简便的途径。G—CsF主要作用于中性粒细胞系(1ineage)造血细胞的增殖、分化和活化。但大量的中性粒细胞在组织内聚集和激活后，可通过“呼吸爆发”效应，释放出一系列对组织有害的物质，而引起组织损伤。因此，中性粒细胞是多器官功能衰竭、成人呼吸窘迫综合症及全身性炎症反应综合症发病的主要原因之一。如果用筛选到的scFv单链抗体拮抗G—cSF的活性，调节中性粒细胞达到动态平衡，则将有助于治疗上述炎症反应。在细菌感染的发热病人中G—CSF的阳性率达82％。在非细菌性感染发热病人血清G—CSF的阳性率很低，才为7％，故G—c

4、SF测定对各种发热性疾病的诊断，鉴别有重要意义，是一个较好的临床诊断指标。人源抗G—csF单抗的研制成功为进一步研究G—csF的生理功能提供了十分有用的检测工具；为抗体治疗和基因治疗提供了潜在而又全新的的治疗方法，如以a11ti—G—csFScFv作为生物导弹靶向载体特异性攻击高表达的病变组织，以浙江人学博上学位论文ScFv单链抗体拮抗G．cSF的活性，调节中性粒细胞达到动态平衡，或以G—csF为阻断靶点的抗体治疗等设想；本研究为获得人源化人类细胞因子单抗提供了高效简捷的方法。本研究以rhG。CsF为靶抗原应用构建人源抗体库获

5、得全人源anti．rhG．CSFScFv抗体，经查新检索国内外尚未有应用人源性噬菌体抗体库研制rhG．cSF单抗的报导，获得的基因工程ScFv抗体分子经NCBIBLAST检索表明，该抗体的重链基因与已报道的人免疫球蛋白重链基因序列同源性高达98％，该基因编码的确实是一种人源单克隆抗体，有广泛的临床应用前景。对深化G．CsF的研究有重要的意义。浙江大学博L学位论文专业术语汇编与缩写：aa⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯氨基酸G．CSF⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯粒细胞集落刺激因子rhG—CSF(r

6、ecombinanth啪anG．csn⋯⋯⋯重组人粒细胞集落刺激因子TNFftumornecrosisfi地tor)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯肿瘤坏死因子PCR(p01ymerasechainreaction)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯聚合酶链式反应kDa(kilo—dalton卜⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·千道尔顿ORF(openreading矗ame)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯开放阅读枢架矗l锄entousbacterialphage⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯丝状噬菌体helpphage(M13)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯辅助噬菌体phagedisplaytechnology⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯噬菌体显示技术phagerescue⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯噬菌体援救phagemid⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯噬菌粒recombinantphagea埘body⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯重组噬菌体抗体EcoliTGl(supuressorstrain)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯UAG终止子抑制型菌株EcoliHB2151(nomsupuressors打ain)⋯⋯⋯⋯UAG终止子非抑制型菌株bacterialpe

8、riplas⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯细菌周质腔hematoDoiesiscvtokine⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯造血细胞因子PBL(pe印heralBlymphoc”es)⋯⋯⋯⋯⋯外周血B淋巴细胞PAb(p01yclonalantibody)⋯⋯⋯⋯⋯⋯