GBT5009.23-1996-食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定方法.pdf

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1、GB/T5009.23—1996中华人民共和国国家标准食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定方法MethodfordeterminationofaflatoxinsB1,B2,G1,G2infoodsGB/T5009.23—19961主题内容与适用范围本标准规定了各种食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定方法。本标准适用于各种食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定。在薄层板上的最低检出量：黄曲霉毒素B1、G1为0.004μg，B2、G2为0.002μg。本方法的最低检出浓度：黄曲霉毒素B1、G1为5μg/kg，B2、G2为2.

2、5μg/kg。2引用标准GB/T5009.22食品中黄曲霉毒素B1的测定方法第一篇薄层色谱法3原理样品经提取、浓缩、浓缩、薄层分离后，在365nm紫外光下，黄曲霉毒素B1、B2产生蓝紫色荧光，黄曲霉毒素G1、G2产生黄绿色荧光，根据其在薄层板上显示的荧光的最低检出量来定量。4试剂4．1所用试剂同GB/T5009.22中3.1～3.13。4．2次氯酸钠溶液（消毒用）：配制方法见GB/T5009.22中3.16.4．3苯-乙醇-水（46+35+19）展开剂：取此比例配制的溶液置于分液漏斗中，振摇5min，静置过夜。将上下层溶液分别置于具塞瓶中保存，

3、上下层交界的溶液弃去不要。若溶液出现混浊，则在80℃水浴上加热，待清晰后，即停止加热，取上层溶液作展开剂用。另取一定量的下层溶液置小皿中，再放于展开槽内。将薄层板放入展开槽内，预先饱和10min后展开。4．4硫酸（1+3）。4．5黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准溶液。4．5．1单一标准溶液（10μg/mL）：准确称取黄曲霉毒素B1、G1标准品各1～1.2mg，黄曲霉毒素B2、G2标准品各0.5～0.6mg，用苯-乙腈混合液作溶剂。配制方法、浓度及纯度的测定参照GB/T5009.22中3.14。黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的分子量及用苯-

4、乙腈作溶液时的最大吸收峰的波长及摩尔消光系数见下表。最大吸收峰波长，黄曲霉毒素名称摩尔消光系数分子量nmB134619800312B234820900314G135317100328G235418200330中华人民共和国卫生部1996—06—19批准1996—09—01实施GB/T5009.23—19964．5．2各标准使用液：以下各标准液均用苯-乙腈混合液配制。4．5．2．1黄曲霉毒素混合标准使用液Ⅰ：每毫升相当于0.2μg黄曲霉毒素B1、G1及0.1μg黄曲霉毒素B2、G2，作定位用。4．5．2．2黄曲霉毒素混合标准使用液Ⅱ：每毫升相当于

5、0.04μg黄曲霉毒素B1、G1及0.02μg黄曲霉毒素B2、G2，作最低检出量用。5仪器同GB/T5009.22中4.1～4.9。6分析步骤6．1取样：同GB/T5009.22中5.1。6．2提取：同GB/T5009.22中5.2。6．3测定：6．3．1单向展开法6．3．1．1薄层板的制备：同GB/T5009.22中5.3.1.1。6．3．1．2点样：同GB/T5009.22中5.3.1.2。滴加式样如下：第一点：10μL黄曲霉毒素混合标准使用液Ⅲ。第二点：20μL样液。第三点：20μL样液+10μL黄曲霉毒素混合标准使用液Ⅲ。第四点：20μ

6、L样液+10μL黄曲霉毒素混合标准使用液Ⅰ。6．3．1．3展开与观察：黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的比移值依次排列为B1＞B2＞G1＞G2。在展开槽内加10mL无水乙醚，预展12cm，取出挥干，再于另一展开槽内加10mL丙酮-三氯甲烷（8+92），展开10～12cm，取出。在紫外光灯下观察结果，方法如下。6．3．1．3．1由于样液点上加滴黄曲霉毒素混合标准使用液Ⅰ或Ⅲ，或使黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2分别与样液中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2荧光点重叠。如样液为阴性，薄层板上的第三点中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2依次为0.000

7、4,0.0002,0.0004,0.0002μg，可用作检查在样液内黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的最低检出量是否正常出现。如为阳性，则起定位作用。薄层板上的第四点中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2依次为0.002,0.001,0.002,0.001μg，主要起定位作用。6．3．1．3．2若第二点在与黄曲霉毒素B1、B2的相应位置上无蓝紫色荧光点；或在与黄曲霉毒素G1、G2的相应位置上无黄绿色荧光点，表示样品中黄曲霉毒素B1、G1含量在5μg/kg以下；B2、G2含量在2.5μg/kg以下；如在相应位置上有以上荧光点，则需进行确证试验。6．3

8、．1．4确证试验：6．3．1．4．1黄曲霉毒素与三氟乙酸反应产生衍生物，只限于B1和G1；B2和G2与三氟乙酸不起反应。B1和G1的衍生物比移值为B1