乳品中黄曲霉毒素b1,b2,g1,g2,m1的测定

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1、固相萃取-高效液相色谱法检测乳品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1迪马科技摘要：建立测定乳品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1含量的固相萃取-高效液相色谱方法。样品经乙腈提取，ProElutAFT固相萃取柱净化，以正己烷和三氟乙酸衍生后，通过DiamonsilC18(2)色谱柱分离，流动相为水、乙腈和异丙醇，梯度洗脱，流速1mL/min，荧光检测器检测，激发波长365nm，发射波长435nm，外标法定量。结果表明5种黄曲霉毒素在0.01~5μg/L范围内线性关系良好。样品加标回收率在80%~100%之间，相对标准偏差1.58%~4.21%，方法检出限为牛奶

2、：0.02~0.06μg/kg，奶粉：0.04~0.12μg/kg。DeterminationofaflatoxinsB1、B2、G1、G2、M1indairyproductsbysolidphaseextraction-highperformanceliquidchromatographic(SPE-HPLC)Abstract：ToestablishthemethodfordeterminationofaflatoxinsB1、B2、G1、G2、M1indairyproductsbysolidphaseextractionwithhighperformanceliq

3、uidchromatographic(SPE-HPLC).Thesampleswereextractedwithacetonitrile,thenpurifiedwithProElutAFTcolumn,derivedwithhexaneandtrifluoroaceticacid,andseparatedonDiamonsilC18(2)column,mobilephaseiswater、acetonitrileand2-propanolwithaflowrateof1mL/min,detectedbyfluorescencedetector,EX:360nm、Em

4、:435nm,quantifiedbyexternalstandardmethod.Theresultindicatedthatthecalibrationcurvesshowedgoodlineaaritiesforaflatoxinsintherangeof0.01-5μg/L.Thespikedrecoverieswereintherangeof80%-100%withrelativestandarddeviationsof1.58%-4.21%,thelimitsofdeterminationwere0.02-0.06μg/kginmilkand0.04-0.

5、12μg/kginmilkpowder.黄曲霉毒素(AFT)是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉和寄生曲霉产生的次生代谢产物，是现在发现的毒性和致癌性最强的天然污染物，其毒性是氰化钾的10倍，砒霜的68倍。黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1是最为常见且最重要的五种衍生物，可存在于土壤、坚果、谷物、食用油、及乳制品中。由于新生儿童免疫系统不完善，抵抗力较弱，所以婴幼儿食品尤其是奶粉、牛奶中黄曲霉毒素的检测尤为重要。目前，黄曲霉毒素的检测方法有薄层色谱法(TLC)[1]、酶联免疫吸附法(ELISA)[2-3]、高效液相色谱-

6、荧光法(HPLC-FLD)[4-7]；高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)[8-10]。TLC法对人和环境的污染系数大，操作繁琐，灵敏度不高，很难普及。ELISA方法虽然操作简单，但定量不精确，易出现假阳性结果。HPLC-MS法仪器昂贵，检测成本较高，而HPLC-FLD操作简单，选择性好，灵敏度高，定量准确，同时仪器价格适中，适宜推广。另外，乳制品成分复杂、蛋白含量高、含有多种维生素及微量元素，所以样品净化在检测过程中占有重要的地位，目前的净化方法主要采用免疫亲和柱(IAC)净化[11-13]和其它固相萃取柱净化，如石墨化碳黑柱[14]；CN柱[15]；HLB柱

7、[16]等。IAC虽然选择性好但是价格昂贵、储存条件苛刻、保存期短，其它固相萃取柱净化过程中涉及步骤较多，且净化效果一般。故本文选择ProElutAFT固相萃取柱结合高效液相色谱荧光检测器测定乳品中黄曲霉毒素，方法灵敏度高，步骤简单，净化效果好，成本较低，适合推广。1实验部分1.1仪器与试剂岛津LC-20A高效液相色谱仪，RF-20A荧光检测器，柱温箱，涡旋混合器(予华仪器)，高速离心机(予华仪器)，旋转蒸发仪(予华仪器)，12孔固相萃取装置(迪马公司)，DiamonsilC18(2)，250mm×4.6mm，5μm色谱柱(迪马公司)，ProElut