芳香烃受体核易位蛋白arnt对肝癌生长和侵袭转移的影响

《芳香烃受体核易位蛋白arnt对肝癌生长和侵袭转移的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、ARNT对肝癌生长和侵袭转移的影响中文摘要肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，其侵袭转移与术后复发是患者死亡的主要原因之一。因此，探索肝癌侵袭转移与复发的分子机制，寻求有效的应对措施，对改善肝癌患者的预后具有十分重要的意义。HIF．1信号通路在肿瘤发生发展中的作用已受到广泛地关注，其中主要集中在HIF．1a的肿瘤生物学功能上，而对ARNT(HIF．1D)的生物学功能知之甚少。本研究首先观察ARNT在肝癌和癌旁组织中的表达与肝癌患者术后预后的关系；然后探讨ARNT表达改变对实验性肝癌生长和侵袭转移的影响；最后进一步明确ARNT影响肝癌生长与侵袭转移

2、的可能分子机制。第一部分芳香烃受体核易位蛋白ARNT在肝癌组织中的表达及其意义目的：比较ARNT在肝癌及相应癌旁组织中的表达差异，分析ARNT在原发性肝癌中的表达与原发性肝癌临床病理特征及其预后的关系。方法：应用组织微阵列技术和免疫组织化学染色方法，回顾性研究105例行手术切除并经病理学证实的肝细胞癌标本(癌和癌旁组织)中ARNT的表达情况，Log．rank法比较肝癌中不同ARNT表达组间生存率和复发率的差别，COX回归模型进行单因素、多因素分析各有关因素对患者生存率和复发率的影响。结果：免疫组化染色显示ARNT为核内表达蛋白，在肝癌和癌旁

3、组织中的阳性率分别为53．3％和71．4％，两者间差异明显(p=o．007)。ARNT表达与肿瘤大小相关(p=o．009)，而与年龄、性别、AFP、播散灶、TNM分期、癌栓和肝硬化背景等临床病理因素无关(难均>o．05)。肿瘤ARNT表达与肝癌患者的生存和复发显著相关，其中ARNT低表达组患者的中位生存时间(26．3months)明显短于ARNT高表达组患者的中位生存时间(84．0months)，舢．000；ARNT低表达组患者的术后5年复发率(46．9％)明显高于ARNT高表达组患者(32．1％)，旷=0．016。COX回归模型单因素分析

4、发现肿瘤大小、播散灶、TNM分期、癌栓、AFP、肝‘硬化背景和癌内ARNT表达是影响肝癌患者总体生存的相关因素，而且肿瘤大小、播散灶、TNM分期、癌栓、癌内ARNT表达与肿瘤复发相关；多因素分析则发现肿瘤TNM分期是影响肝癌患者生存的独立预后因素，而癌内ARNT表达是影响肝癌患者预后的独立保护因素。结论：ARNT在肝癌发生中可能有重要作用；癌内ARNT低表达是原发性肝癌不3ARNT对肝癌生长和侵袭转移的影响中文摘要良预后的独立影响因素。第二部分ARNT表达改变对实验性肝癌生长与侵袭转移的影响目的：明确ARNT表达与实验性肝癌生长和侵袭转移的

5、关系。方法：构建靶向Amt的重组慢病毒载体pLentiARNTi．1和pLentiARNTi．2，转染HCCLM6细胞，筛选出GFP稳定表达的细胞株，经RT．PCR和WesternBlotting验证ARNT表达改变后，分别用细胞荧光定量法、FACS、Transwell侵袭试验和细胞划痕试验检测细胞增殖能力、周期时相、侵袭能力以及运动能力的变化。将细胞接种子裸鼠体内，研究ARNT表达改变后，肝癌体内生长与肺转移、腹腔转移能力的改变。结果：靶向Amt的重组慢病毒载体pLentiARNTi．1和pLentiARNTi．2转染HCCLM6细胞，筛

6、选出两株ARNT表达改变明显的稳定细胞株LentiARNTi．1和LcntiARNTi．2；细胞荧光定量法检测结果显示ARNT表达越低，细胞增殖越快；FACS检测结果显示ARNT表达越低，S-phase占的比例越大；Transwell侵袭和细胞划痕试验结果表明ARNT低表达组细胞的侵袭和运动能力明显增强；体内实验结果显示ARNT低表达组肿瘤生长加快，肺转移灶和腹腔转移灶明显增加。结论：ARNT与肝癌的生长及侵袭转移负相关，具有抑制肝癌生长和侵袭转移的作用。第三部分芳香烃受体核易蛋白AI蝌T抑制肝癌生长与侵袭转移的机制研究目的：探讨ARNT抑

7、制肝癌生长与侵袭转移的分子机制。方法：在HCCLM6细胞中，用RealtimePCR和WesternBlotting检测ARNT表达下调后与细胞增殖、侵袭转移相关的靶基因或靶蛋白的表达变化；用IHC染色验证以上指标在裸鼠原位移植瘤中的表达改变。结果：RealtimePCR和WesternBlotting检测结果表明，在下调ARNT表达的HCCLM6细胞中，增殖相关指标cyclinE和CDK2表达水平升高；侵袭转移相关指标MMP7表达水平升高，TIMP—l、TIMP．2表达水平下降。IHC染色结果证实以上指标在体内的变化。结论：ARNT可通过

8、下调cyclinE和CDK2、上调TIMP．1和TIMP．2、下调MMP7的表达来抑制肝癌的生长和侵袭转移。4ARNT对肝癌生长和侵袭转移的影响中文摘要关键词：芳香烃受体核易位蛋