靶向免疫细胞的脂质载体的研究

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1、博士学位论文Ph．D．DissertationSubmittedtoShanghaiJiaoTongUniversityLIPIDBASEDDEL姗RYSYSTEMTARGETD呵GToTHE耵惭UNECELLSAuthor：QianDingAdvisor：Prof．YuhongXuSpecialty：PharmaceuticsSchoolofPharmacyShanghaiJiaoTongUniversitySeptember2012上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本

2、论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：J茹日期：2012年9月18日上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密团。(请在以上方

3、框内打“4”)学位论文作者签名：心甾指导教师签名：鼎√‘日期：2012年9月18日日期：2012年9月18日撒一惴撇⋯议书嗍㈣偶709014所在姓名丁茜学号0071709014药学学科指导教师徐宇虹答辩2012·9-18答辩上海交通大学闵行校区日期地点论文题目靶向免疫细胞的脂质载体的研究一糕粼鬟一’缫燃．渊绻麓辫一讷论交芒逄达巫1璃±鬈僦如惭遗脚氆嗽。g日，殳H职务姓名职称．单位签名主席陆伟跃教授复旦大学N渺答懒辩委员胡钧研究员中科院上海应用物理所委委员金拓教授上海交通大学色拓、员会委员傅磊教授上海交通大学锄、1l成员委员王永祥教授上海交通大学‘堋f签委员l}～名委员秘书彭金良

4、讲师上海交通大学勃S为靶向免疫细胞的脂质载体的研究摘要在过去几十年的脂质体有各种医疗应用，包括分子成像，药物输送，以及靶向性治疗。脂质体表面积大，结构具有弹性，有很大的修饰改良的潜力，其在体内的药代动力学表现出独特的性质。传统脂质体易被网状内皮系统吞噬，通过EPR效应实现被动靶向到肝脏，肺等特定组织；长循环脂质体经过高亲水双性分子的修饰，使得脂质体能够逃避RES的吞噬，延长其在血液中的循环时间，增加药物释放时间和作用时间，但缺乏靶向性，需要对脂质体表面进行额外的靶向配体修饰。目前，针对淋巴细胞的的靶向脂质体研究甚少，而在多种疾病中，治疗的失败往往是由于淋巴系统中隐匿的病灶，由于

5、淋巴系统不同于其他身体器官，使得常规脂质体不能达到有效药物剂量，又或者因为限制性毒性不能达到治疗效果。本研究的重点是采用人工筛选的靶向配体多肽或者由免疫细胞自身剪切的多肽，对淋巴细胞形成靶向，构建淋巴系统靶向的脂质体，使其特异性的作用于淋巴细胞，达到治疗或者预防的效果。在人工筛选多肽配体的脂质体研究中，我们根据CD40／CD40L这一对与自身免疫疾病相关的通路，针对CD40L设计多肽配体，期望借助这一配体实现对CD40／CD40L信号通路的阻断，同时对此通路中过博士学位论文度活跃的T细胞实现靶向杀伤。而隐形脂质体作为多肽配体展示以及细胞毒性药物的载体己经有大量的研究，我们结合筛

6、选到的特异性配体，辅以细胞毒性药物，使用脂质体作为两者的载体，使其同时能够完成通路阻断和T细胞靶向杀伤的效果。我们使用计算机辅助模拟，确定受体和配体作用位点，筛选出具有与配体结合潜能的候选肽。后续使用表面等离子共振技术，对计算机虚拟筛选得到的候选多肽进行分子层面筛选。如此得到的多肽，我们再进行细胞层面的结合力筛选，最终确定一个靶向多肽来进行CD40L+T细胞靶向毒性的体外和体内实验。实验结果表明，此多肽修饰的脂质体确实可以介导体外CD40L+T细胞的靶向杀伤，同时在对CD40／CD40L信号通路过度活化造成的动物疾病模型的治疗中，多肽修饰的脂质体与非靶向脂质体相比也表现出了较好

7、的治疗效果。在天然表位肽制备脂质体的研究中，我们利用抗原呈递细胞中MHC—II类分子呈递抗原的过程，将抗原蛋白自然剪切成T细胞表位多肽。目前的研究，只能通过人工洗脱得到这些肽段或者计算机模拟后经过化学合成得到表位肽，费时费钱。而我们的研究则将此天然剪切的T细胞表位肽作为整体，通过脂质体重新组装抗原呈递细胞上含有MHC-11分子和表位肽的膜片段，考察这一复杂的黑箱系统是否能对下游T细胞进行活化，引起机体的免疫反应。由于脂质体是膜蛋白的良好载体，所以使用脂质体可以很好的保持MHC-11分子和表位