大豆磷脂对凋亡相关基因及抗氧化能力的影响

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1、大豆磷脂对学习记忆相关基因及抗氧化能力的影响摘要磷脂是一种纯天然的营养保健品，主要存在于动、植物的细胞中，是细胞膜的主要组成成分。大豆磷脂可以维持生物膜正常的结构与功能，与细胞的生长、增殖、分化、癌变紧密联系，其降解产物还参与细胞的信号转导、代谢调控，具有改善记忆、延缓衰老、调节血脂、抗肿瘤、健脑等多种生理作用。因此本实验研究大豆磷脂对学习记忆相关基因及抗氧化能力的影响，并探讨其作用机制，为大豆磷脂更好的应用提供实验依据，进而对神经细胞的保护作用等方面提供新的思路。实验方法：1．建立D．半乳糖致衰大鼠模型，将50只SD雄性大鼠按体重随机均分成

2、5组，即正常对照组、模型对照组、大豆磷脂低剂量组(0．5g／l(鲥)、中剂量组(1．0g／l(鲋)、高剂量组(1．5g／l(g／d)。模型对照组、大豆磷脂组皮下注射D-半乳糖50mg／l【鲥，正常对照组注射等量生理盐水。每天定时灌胃和注射各1次。第30d测学习记忆，第45d处死大鼠，取各组织分别测定MDA含量、SOD和CAT活力。2．建立D．半乳糖致衰大鼠模型，第45d处死大鼠，提取海马和大脑皮层中总l蝌A，采用逆转录聚合酶链反应(1弭PCR)方法，定量检测其海马和皮层中锨x、筇?、＆，-2、c如、Ⅳ<■M的基因表达。3．体外培养神经细胞。取

3、出生24h内小鼠，75％酒精消毒，取大脑，剔除脑膜和血管，剪成l舢n3小块，0．125％胰蛋白酶37℃消化20min，终止消化后1000r／min离心5min，取沉淀，制成细胞悬液，细胞计数并调整密度至2×106个／mL，接种入经O．1％L．多聚赖氨酸包被过的培养板内，置37℃、5％C02、‘饱和湿度条件下培养。24h后全量换液，接种3d后，再次全量换液，加入含不同浓度大豆磷脂的完全培养液，继续培养。细胞培养6d后即做下一步实验。MTT法和台盼蓝法检测细胞活力，收集细胞，分别测定蛋白质总含量、MDA含量和CAT活性。4．体外培养神经细胞。在倒

4、置显微镜下观察不同时期神经细胞的形态变化，细胞培养6d后，通过A0忸B荧光染色、Hoechst33258荧光染色、单细胞凝胶电泳观察细胞结构，扫描电镜观察细胞表面超微结构。实验结果：1．与正常对照组相比，致衰大鼠学习记忆能力显著下降(氏O．05)，各组织中MDA含量显著增加，SoD、CAT活性明显减弱(P．<0．05)；与模型对照组相比，大豆磷脂组的大鼠学习记忆能力明显提高(尸<0．05)，各组织中MDA含量显著减少，SOD、CAT活性显著增强(P

5、力。2．与正常对照组相比，模型对照组娜训加与p5．罗／J胁c，切的比值均增大，差异极显著(尸

6、，提高肌，．2、ⅣC爿M基因表达。3．MTT染色法结果显示，与正常对照组相比，大豆磷脂10。m咖Irl0。5m幽nL组神经细胞活力增强，并且随着大豆磷脂浓度的增大，神经细胞活力逐渐增强，大豆磷脂lO。5mg／rnL组与正常对照组之间差异显著(P<0．05)，但是大豆磷脂10。5mg，n儿一lO‘3m咖L组中神经细胞活力减弱，且大豆磷脂10‘3m咖L组的细胞活力略低于正常对照组，说明大豆磷脂的浓度并不是越高越好，而是应该控制在一定的浓度范围内。台盼蓝染色结果显示各组之间神经细胞存活率差异不显著(尸>o．05)。神经细胞中蛋白质总含量和MDA含量

7、均无明显差异(p帕．05)，CAT活性有增强的趋势(尸>o．05)。实验表明，大豆磷脂对神经细胞的抗氧化能力有一定的促进作用。4．倒置显微镜下，细胞接种4h开始贴壁，分布均匀，细胞圆并透明；培养24h后，细胞绝大部分呈梭形，细胞呈立体隆起状，表面光滑，细胞有单极突起出现，少数细胞还有双极突起出现；培养3d后，细胞主要呈梭形形态，且胞体饱满，细胞突Ⅱ起增多、增长，双极和多极突起明显增多，光晕明显，细胞之间开始形成完整的神经网络结构：培养6d后，细胞呈梭形、三角形等多种形态，胞体明显增大，突起增粗，增长，突起数量增多。经Ao／EB荧光染色后，正常

8、对照组与大豆磷脂组均呈现荧光深浅不一的结构样特征，核染色质着绿色且细胞形态结构正常。HoechSt33258染色结果显示，正常对照组和大豆磷脂组细胞核形态均规则，呈