温脾通络开窍方对ad大鼠的认知行为及tau蛋白、gsk-3β、pp2a影响的研究

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2、称ADAlzheimer，Sdisease老年性痴呆OAOkadaicacid冈田酸PP2AProteinphosphatasetype2A蛋白磷酸酶2AGsk-313Glycogensynthasekinase糖原合酶激酶一3pNFTNeurofibrillarytangle神经元纤维缠结PⅢsPairedhelicalfilaments双螺旋纤维丝SPSenileplaques老年斑PMSFPhenylmethanesulfonylfluoride苯甲基磺酰氟MWMMorriswatermazetestMorris水迷宫1中文摘要目

3、的：观察温脾通络开窍方对AD大鼠认知行为及Tau蛋白异常磷酸化的影响，并探讨其可能的机制。方法：3月龄SPF级雄性SD大鼠52只，运用脑立体定位技术向大鼠右侧海马注射冈田酸制备AD大鼠动物模型，造模14天后，采用经典的Morris水迷宫进行老年性痴呆大鼠模型的筛选，将造模成功大鼠随机分为AD模型组，西药对照组，温脾通络开窍方高、中、低剂量组，另设假手术组。于造模后第2O天开始治疗，各治疗组给予相应的药物灌胃，模型组及空白组给予等体积的双蒸水灌胃。治疗21天后检测各项指标。采用经典的Morris水迷宫进行认知行为学评价，蛋白免疫印迹法检测

4、AD大鼠海马组织Tau蛋白磷酸化总量，酶联免疫吸附法检测蛋白质磷酸酶2A(PP2A)Ym糖原合酶激一313(Gsk-313)的活性，并观察温脾通络开窍方对上述指标的影响，探讨温脾通络开窍方抗AD的可能机制。结果：行为学结果显示：温脾通络开窍方高、中、低剂量组AD大鼠在Morris水迷宫测试中，逃避潜伏期均明显缩短，成功找到平台次数均明显增加。其中在定位航行试验中模型组平均潜伏期比空白组明显延长，有显著差异(尸

5、量组与西药组比较有显著性差异(P<0．01)。中、高剂量组也有差异(P<0．01)。在空间探索实验中，模型组较空白组大鼠成功找到平台的次数明显下降，有显著差异(P<0．01)。中药各组与模型组相比，差异均具有统计学意义(P<0．01)。西药组与高、中剂量组比较有差异(P0．05)，高剂量组与中剂量组比护<0．05)。并且中药各组之间存在一定的量效关系。蛋白免疫印迹法结果显示：温脾通络开窍方高、中、低剂量组AD大鼠海马Tau蛋白磷酸化水平较空白组比较差异有统计学意义(P<0．01或P<

6、0．05)。其中模型组与空白组比较含量显著增加(P<0．01)，低量组和西药组与模型组比较无差异(P>0．05)，中药高、中剂量组与模型组比较显著降低(P<0．05)，与西药组比较也有差异(P<0．01)，但两者之间无差异(P>0．05)。高、中、低量组之间存在一定量效关系。酶联免疫吸附法结果显示：模型组Gsk-313的活性较空白组均有显著性的提高，两者比较有统计学差异(P<0．01)，各中药组AD大鼠Gsk-313的表达均较模型组有所下降，低剂量组和西药组与模型组比较无差异(P>0．05)，中药高、中剂量组与模型组相比有显著性差异(P

7、<0．01或P<0．05)，与西药组相比，高剂量组Gsk-313的活性有显著性差异。模型组PP2A的活性较空白组均明显降低，两者比较有统计学差异(P<0．05)，各中药组AD大鼠PP2A的活性均较模型组有所升高，低剂量组和西药组与模型组比较无差异(P>0．05)，中药高、中剂量组与模型组相比有显著性差异(P<0．01或P<0．05)，与西药组相比，高剂量组Gsk-313的活性有显著性差异。两组数据中，尤以中药高剂量组的作用最明显。中药高、中、低剂量组存在一定量效关系。结论：温脾通络开窍方可显著改善AD大鼠的学习记忆障碍，其可能的机制是通

8、过抑制Gsk-313的活性和提高PP2A的活性从而降低Tau蛋白异常过度磷酸化的水平。关键词：温脾通络开窍方；老年性痴呆；行为学；Tau蛋白；Gsk一313；PP2AEffectofWenpiTongluo