mtor+sirna与雷帕霉素对宫颈癌hela细胞mtor、4ebp1表达影响的研究

《mtor+sirna与雷帕霉素对宫颈癌hela细胞mtor、4ebp1表达影响的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheSignificanceofmTORExpressioninCervicalCancerandtheInfluenceofsiRNAandRapamyeinonGeneExpressionofmTORinHumanHelaCellByJianpingYangSupervisor:Prof.KuishengChenShengleiLiPathology&PathophysiologyBasicMedicalCollege

2、April2012摘耍mTORsiRNA及雷帕霉素对宫颈癌Hela细胞mTOR、4EBP1表达的影响硕士学位申请人：杨建萍指导老师：陈奎生教授李晟磊副教授郑州大学基础医学院病理学教研室河南省肿瘤病理重点实验室郑州450052摘要背景和目的-宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，在全球范围内，每年约有20万女性死于宫颈癌，严重危害女性的健康。宫颈癌发病隐匿，侵袭性强，多伴有早期淋巴结转移，复发率高，预后差。雷帕霉素靶蛋白（targetofrapamyein,TOR)是一类高度保守的蛋白激酶家族，普遍存在于生物界的各种生物中。TOR基因最

3、早在酵母中被发现，随后在哺乳动物细胞中也发现了结构和功能相似的TOR蛋白，命名为哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammaliantargetofrapamyein,mTOR)。mTOR基因定位于lp36.2，是Ser/Thr蛋白激酶家族成员之一，分子量为289kD，由2549个氨基酸组成，因为其C端结构域与磷脂酞肌醇3-激酶(P13K)的催化结构域高度同源，亦属于瞵脂酰肌醇激酶相关激酶（phosphatidylinositolkinase-relatedkinase,PIKK)家族，在识别信号、信号传导、细胞生长与分裂增殖中起着关键作用。尤其

4、是mTOR作为磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(P13K/Akt/mTOR)信号转导通路的下游效应子，其所介导的信号转导通路及其调控的相关癌基因与抑癌基因的异常表达与多种恶性肿瘤的发生、发展有关。研究表明，在人食管癌、I摘n肿癌、乳腺癌及'!'？细胞癌等实体肿瘤屮均存在mTOR的过表达；另冇研究表明，在宫颈癌细胞系中存在mTOR信号通路的异常激活，并在宫颈癌组织屮呈i见高表达状态。细胞的转化控制在调节细胞生长的过程中起到关键的作用。mRNA结合翻译因子（eIF4s)根据其不同的特性可以选择性进行凋节，特别是在某种程度

5、上可以抑制其5'端非翻泽区的二级结构的不同的mRNA的翻译。eIF4E的过度表达导致细胞转化或无序增长。它也增强了某些mRNA的翻译，包括细胞周期蛋白D1(CyclinDl)。eIF4E的表达下降，导致细胞的生长率降低。转化细胞表达的eIF4E的水平升高。然而，如何控制eIF4E的磷酸化和信号转导通路中的作用仍有待研究。ras基因可导致eIF4E的磷酸化增加，eIF4E的表达下降时的Ras转化细胞的能力减少，这意味着eIF4E的是RAS介导转化的一个重要介质。最近发现eIF4E的抑制剂（eIF4E的结合蛋白，4EBP1/2),又增加了该

6、信号传导途径的功能和作用。虽然4EBP1在细胞转化中的作用（或阻滞作用）尚不十分清楚，但这些研究仍然是令学者们感兴趣的。还应当指出，4EBP1可能受到p70S6K传导通路的控制，它在其中起到细胞周期进程的调控作用。目前mTOR及4EBP1已成为抗肿瘤领域研究的热点。RNA干扰（RNAinterference,RNAi)在mRNA7_K平，以双链RNA(doublestrandRNA,dsRNA)为工具，诱导特异性基因沉默的过程，即序列特异性转录后基因沉默（post-transcriptionalgenesilencing,PTGSRNA

7、)。dsRNA在细胞内特异性核酸酶（Dicer)作用下，裂解为小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA),约有21bp-23bp的siRNA和多聚核酸酶螯合，形成RNA诱导沉默复合体（RNA-inducedsilencecomplex,RISC),后者和siRNA结合，有似RNA酶的作用使mRNA降解。RNAi技术因具有精确、高效、操作简单的特点，而被广泛应用于基因功能研究、抗肿瘤、抗病毒、信号传导通路和基因治疗，RNAi有望成为生命科学及基因工程研究的重要工具。雷帕霉素(Rapamyein)是从细菌Strept

8、omyceshygroscopicus中分离提取出來的一种新的大环内酯类免疫抑制剂，经不同的细胞因子受体达到阻断信号传导的作用，阻断T淋巴细胞以及别的细胞从G1期到S期的进程，发挥免疫抑制效应。雷帕霉素也是